一、產(chǎn)品概述

本產(chǎn)品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款針對(duì)人CDK5RAP2蛋白的高親和力兔多克隆抗體（貨號(hào) IHC-00063），經(jīng)抗原親和純化制備。該抗體經(jīng)驗(yàn)證適用于免疫細(xì)胞化學(xué)/免疫熒光（ICC-IF）檢測(cè)，僅供研究使用。

CDK5RAP2（CDK5 regulatory subunit-associated protein 2）又稱Cep215或MCPH3，是中心體相關(guān)蛋白，在神經(jīng)干細(xì)胞分裂過(guò)程中參與微管組織中心定向及有絲分裂紡錘體形成。CDK5RAP2與Cdk5的激活亞基p25NCK5A結(jié)合，而Cdk5是哺乳動(dòng)物大腦發(fā)育中至關(guān)重要的腦特異性周期蛋白依賴性激酶。該基因突變與小頭畸形（MCPH3型）密切相關(guān)，使其成為神經(jīng)發(fā)育及細(xì)胞周期研究領(lǐng)域的重要靶點(diǎn)。

二、產(chǎn)品規(guī)格

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶標(biāo) CDK5RAP2

反應(yīng)種屬 人

應(yīng)用 ICC-IF（免疫細(xì)胞化學(xué)/免疫熒光）

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原 位于第1843位至C末端之間

同種型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人

濃度 500 µg/mL

緩沖液 Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉

儲(chǔ)存條件 2–8°C

有效期 自收貨之日起1年

三、靶標(biāo)詳細(xì)信息

3.1 別名

C48， CDK5 activator-binding protein C48， centrosomal protein 215 kDa， Centrosome-associated protein 215， centrosomin， Cep215， MCPH3。

3.2 功能背景

CDK5RAP2是一個(gè)中心體蛋白，在細(xì)胞分裂和神經(jīng)發(fā)育中具有關(guān)鍵作用：

中心體功能調(diào)控：CDK5RAP2定位于中心體，參與微管成核及有絲分裂紡錘體的正確組裝。它與γ-微管蛋白環(huán)復(fù)合物相互作用，確保神經(jīng)前體細(xì)胞進(jìn)行正常的分裂。

與Cdk5/p25的相互作用：CDK5RAP2最初作為Cdk5激活亞基p25的結(jié)合蛋白被鑒定。Cdk5在神經(jīng)元遷移、分化及突觸可塑性中發(fā)揮重要作用。

小頭畸形相關(guān)性：CDK5RAP2基因突變是常染色體隱性原發(fā)性小頭畸形（MCPH3型）的常見(jiàn)原因?；颊弑憩F(xiàn)為頭圍顯著減小，但大腦皮層結(jié)構(gòu)基本保留，提示該基因在調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞增殖中是很重要的。

中心體相關(guān)蛋白215：CDK5RAP2也被稱為Cep215，是中心體關(guān)鍵組分，與Pericentrin等蛋白共同維持中心體結(jié)構(gòu)和功能。

四、抗體制備與純化

4.1 免疫原及表位定位

本抗體采用的免疫原對(duì)應(yīng)人CDK5RAP2蛋白序列中第1843位至C末端之間的區(qū)域。經(jīng)精確定位，IHC-00063所識(shí)別的表位位于第1843–1893氨基酸區(qū)間（參考序列NP_060719.4）。該區(qū)域位于C端結(jié)構(gòu)域，遠(yuǎn)離其他中心體相關(guān)蛋白的同源區(qū)，具有較高的抗原特異性。

4.2 純化方法

抗體通過(guò)抗原親和層析純化。將針對(duì)CDK5RAP2 C端表位（第1843–1893位）的特異性多肽固定于固相載體，使抗血清中的特異性IgG結(jié)合于該表位，經(jīng)洗脫獲得高純度抗體。此法確保最終產(chǎn)品中只保留識(shí)別目標(biāo)表位的抗體分子，顯著降低非特異性背景，尤其適合ICC-IF等高分辨率成像應(yīng)用。

4.3 濃度測(cè)定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定，以1 mg/mL IgG在280 nm下的吸光度（A280）為1.4作為標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)測(cè)濃度為500 µg/mL。

4.4 緩沖液與防腐劑

抗體儲(chǔ)存于Tris緩沖鹽水（TBS），含0.1%牛血清白蛋白（BSA）作為穩(wěn)定劑，及0.09%疊d化鈉作為防腐劑。BSA可防止抗體在稀釋及儲(chǔ)存過(guò)程中吸附于管壁，保持其穩(wěn)定性。注意：疊d化鈉有毒，操作時(shí)請(qǐng)佩戴防護(hù)手套。若用于活細(xì)胞染色或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，使用前應(yīng)通過(guò)透析或超濾去除疊d化鈉。

五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

收到產(chǎn)品后，請(qǐng)將抗體置于2–8°C條件下儲(chǔ)存。切勿冷凍，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性聚集、效價(jià)下降。在推薦的儲(chǔ)存條件下，自收貨之日起1年內(nèi)可保持穩(wěn)定。由于本抗體濃度為500 µg/mL，不建議分裝凍存（稀釋后穩(wěn)定性下降），應(yīng)于2–8°C原管保存，每次取用后立即放回。

六、應(yīng)用指南：免疫細(xì)胞化學(xué)/免疫熒光（ICC-IF）

本抗體經(jīng)驗(yàn)證適用于ICC-IF，以下提供針對(duì)不同固定方法的優(yōu)化方案。

6.1 推薦稀釋比

甲醛固定細(xì)胞：1:100 – 1:500

甲醇固定細(xì)胞：1:100 – 1:500

丙酮固定：不推薦

6.2 陽(yáng)性對(duì)照

推薦使用人U2OS骨肉瘤細(xì)胞或HeLa細(xì)胞。這些細(xì)胞系中CDK5RAP2定位于中心體，在間期細(xì)胞中呈現(xiàn)為靠近細(xì)胞核旁的1-2個(gè)點(diǎn)狀信號(hào)，在有絲分裂期細(xì)胞中定位于紡錘體極。使用已知的CDK5RAP2抗體或中心體標(biāo)記物（如γ-tubulin）進(jìn)行共定位可作為陽(yáng)性對(duì)照。

6.3 信號(hào)特征與解讀

間期細(xì)胞：CDK5RAP2應(yīng)呈現(xiàn)為1–2個(gè)明亮的點(diǎn)狀信號(hào)，位于中心體（通常緊鄰細(xì)胞核）。

有絲分裂細(xì)胞：信號(hào)位于紡錘體兩極。

陰性對(duì)照：使用免疫前兔血清或僅二抗孵育應(yīng)無(wú)特異性點(diǎn)狀信號(hào)。

6.4 注意事項(xiàng)

1. 透化條件優(yōu)化：過(guò)度透化可能破壞中心體結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致信號(hào)彌散。若Triton X-100濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可降至0.1–0.2%，室溫5–10分鐘。

2. 封閉液選擇：含BSA或正常血清均可。若背景高，可延長(zhǎng)封閉時(shí)間至1小時(shí)或使用商業(yè)封閉液。

3. 抗體稀釋液：建議使用含1% BSA和0.1% Triton X-100的PBS，以降低非特異性吸附。

4. 二抗交叉吸附：確保二抗經(jīng)過(guò)預(yù)吸附處理，以減少與固定細(xì)胞中內(nèi)源IgG的交叉反應(yīng)。

5. 成像條件：CDK5RAP2信號(hào)相對(duì)較弱，建議使用共聚焦顯微鏡或高靈敏度寬場(chǎng)顯微鏡，適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間。

七、參考文獻(xiàn)（部分）：

Bond J， et al. (2005) *Nat Genet* 37: 353–355.

Fong KW， et al. (2008) *Mol Biol Cell* 19: 540–551.

Buchman JJ， et al. (2010) *Curr Biol* 20: 1327–1334.

注意：本產(chǎn)品僅限研究使用，不得用于診斷或治療。用戶應(yīng)自行驗(yàn)證抗體在其特定實(shí)驗(yàn)體系中的適用性。以上信息覆蓋了IHC-00063抗體的全部規(guī)格、應(yīng)用參數(shù)及背景知識(shí)，使用者可據(jù)此快速建立ICC-IF實(shí)驗(yàn)方案，獲得清晰可靠的中心體定位結(jié)果。