一、產品概述

本產品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款針對人Cry1蛋白的高親和力兔多克隆抗體（貨號 A302-614A），經抗原親和純化制備。該抗體適用于免疫沉淀（IP）及蛋白質印跡（WB）檢測，僅供研究使用。

Cry1（Cryptochrome 1）是生物鐘負反饋調控回路中的藍光依賴性核心調節(jié)因子。它與Cry2協同作用，抑制CLOCK|NPAS2-ARNTL復合物介導的E盒依賴性轉錄，從而維持晝夜節(jié)律的周期長度與穩(wěn)定性。與植物和細菌中的光裂解酶同源物不同，哺乳動物Cry1不具有光裂解酶活性，但其能夠將PER蛋白等晝夜節(jié)律核心蛋白轉運至細胞核，完成轉錄抑制。CRY1基因突變與睡眠相位延遲綜合征（DSPD）等晝夜節(jié)律紊亂疾病密切相關，同時也在癌癥、代謝疾病及免疫調節(jié)中發(fā)揮重要作用。

二、產品規(guī)格

參數 詳細信息

靶標 Cry1

反應種屬 人

應用 IP， WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原 位于第536位至C末端之間

同種型 IgG

偶聯物 未偶聯

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人

濃度 200 µg/mL

緩沖液 Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉

儲存條件 2–8°C

有效期 自收貨之日起1年

三、靶標詳細信息

3.1 別名

cryptochrome 1 (photolyase-like)， cryptochrome circadian clock 1， DSPD， PHLL1。

3.2 功能背景

Cry1是哺乳動物晝夜節(jié)律系統的核心組分，其功能機制如下：

轉錄抑制作用：在細胞核內，Cry1與Cry2形成復合物，直接結合CLOCK-BMAL1異二聚體，抑制其介導的Per和Cry自身基因的轉錄激活，形成約24小時的負反饋回路。

核轉運功能：Cry1與PER蛋白相互作用，促進PER蛋白從細胞質轉入細胞核，這是維持周期長度所必需的步驟。

藍光感應（非哺乳動物）：在低等生物中，Cry作為藍光受體；但在哺乳動物中，Cry1的光感應功能已退化，主要作為轉錄抑制因子發(fā)揮作用。

疾病相關性：CRY1基因的功能獲得性突變與家族性睡眠相位延遲綜合征（DSPD）相關；此外，Cry1在多種癌癥中表達異常，影響腫瘤細胞增殖及化療敏感性。

四、抗體制備與純化

4.1 免疫原及表位定位

本抗體采用的免疫原對應人Cry1蛋白序列中第536位至C末端之間的區(qū)域。經精確定位，A302-614A所識別的表位位于第536–586氨基酸區(qū)間（參考序列NP_004066.1）。該區(qū)域位于C端功能域，具有較高的抗原特異性，避免了與Cry2或其他含光裂解酶結構域蛋白的交叉反應。

4.2 純化方法

抗體通過抗原親和層析純化。將針對Cry1 C端表位（第536–586位）的特異性多肽固定于固相載體，使抗血清中的特異性IgG結合于該表位，經洗脫獲得高純度抗體。此法確保最終產品中只保留識別目標表位的抗體分子，顯著降低非特異性背景。

4.3 濃度測定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測定，以1 mg/mL IgG在280 nm下的吸光度（A280）為1.4作為標準。實測濃度為200 µg/mL。相較于部分抗體1 mg/mL的濃度，本抗體濃度較低，使用時需根據推薦稀釋比例進行適當調整，避免因稀釋過度導致信號減弱。

4.4 緩沖液與防腐劑

抗體儲存于Tris緩沖鹽水（TBS），含0.1%牛血清白蛋白（BSA）作為穩(wěn)定劑，及0.09%疊d化鈉作為防腐劑。BSA可防止抗體在低濃度下吸附于管壁，保持其穩(wěn)定性。注意：疊d化鈉有毒，操作時請佩戴防護手套。若用于需要疊氮化物敏感的細胞實驗或動物注射，使用前應通過透析或超濾去除疊d化鈉。

五、儲存與穩(wěn)定性

收到產品后，請將抗體置于2–8°C條件下儲存。切勿冷凍，反復凍融會導致抗體變性聚集、效價下降。在推薦的儲存條件下，自收貨之日起1年內可保持穩(wěn)定。由于本抗體濃度較低（200 µg/mL），不建議再進行分裝凍存（稀釋后更易降解），應直接于2–8°C原管保存，每次取用后立即放回。

六、應用指南

以下推薦條件均經過實驗驗證，用戶可根據具體實驗體系進行優(yōu)化。所有WB實驗的封閉及抗體稀釋均使用5%脫脂奶粉-TBST緩沖液，一抗孵育推薦4°C過夜。

6.1 蛋白質印跡（Western Blot， WB）

推薦稀釋比：1:2000 – 1:10000

注意事項：由于抗體母液濃度為200 µg/mL，按1:2000稀釋后工作濃度為0.1 µg/mL；按1:10000稀釋后工作濃度為0.02 µg/mL。該范圍經驗證有效，但建議s次實驗從1:2000開始，根據信號強度調整。

樣本要求：人細胞裂解液（如HeLa、U2OS、HEK293）。Cry1蛋白分子量約66–70 kDa，使用常規(guī)10% SDS-PAGE凝膠即可有效分離。

轉膜條件：常規(guī)濕轉（100V，60–90分鐘）或半干轉，PVDF或NC膜均可。

6.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation， IP）

推薦用量：每毫克細胞裂解液總蛋白使用6 µg抗體。

由于母液濃度200 µg/mL，取6 µg抗體體積為30 µL。對于1 mg總蛋白的裂解液，加入30 µL抗體原液。

6.3 跨種屬反應性說明

本抗體僅經驗證可識別人（human）Cry1。未測試小鼠、大鼠或其他種屬。根據表位序列（第536–586位）與其他哺乳動物Cry1的比對，人鼠同源性約85%，可能存在交叉反應，但不保證有效。建議優(yōu)先使用人樣本。

參考文獻（部分）：

Griffin EA Jr， et al. (1999) *Science* 286: 768–771.

Kume K， et al. (1999) *Cell* 98: 193–205.

Patke A， et al. (2017) *Cell* 169: 203–215.

注意：本產品僅限研究使用，不得用于診斷或治療。用戶應自行驗證抗體在其特定實驗體系中的適用性。以上信息覆蓋了A302-614A抗體的全部規(guī)格、應用參數及背景知識，使用者可據此快速建立實驗方案，獲得可靠且可重復的檢測結果。