一、產(chǎn)品概述

本產(chǎn)品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款針對(duì)人CHD8蛋白的高親和力兔多克隆抗體（貨號(hào) A301-224A），經(jīng)抗原親和純化制備。該抗體適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）及蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測(cè)，可同時(shí)識(shí)別人和小鼠來(lái)源的靶蛋白，僅供研究使用。

CHD8（chromodomain helicase DNA binding protein 8）是染色質(zhì)域解旋酶DNA結(jié)合蛋白（CHD）家族的成員之一。該家族蛋白以三個(gè)保守結(jié)構(gòu)域?yàn)樘卣鳎喝旧|(zhì)域（chromodomain，參與染色質(zhì)組織修飾）、SNF2樣解旋酶/ATP酶結(jié)構(gòu)域及C端DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域。CHD8通過(guò)與核小體相互作用參與染色質(zhì)重塑，從而調(diào)控轉(zhuǎn)錄。研究表明，CHD8可與duplin（wnt信號(hào)通路中的調(diào)控蛋白）及CTCF（異染色質(zhì)形成相關(guān)蛋白）發(fā)生相互作用。此外，CHD8基因突變與自閉癥譜系障礙（AUTS18）密切相關(guān)，使其成為神經(jīng)發(fā)育及表觀遺傳學(xué)研究的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

二、產(chǎn)品規(guī)格

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶標(biāo) CHD8

反應(yīng)種屬 小鼠， 人

應(yīng)用 IHC， IP， WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原 位于第600–650位氨基酸之間

同種型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人

濃度 1000 µg/mL（1 mg/mL）

緩沖液 Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

儲(chǔ)存條件 2–8°C

有效期 自收貨之日起1年

三、靶標(biāo)詳細(xì)信息

3.1 別名

ATP-dependent helicase CHD8， AUTS18， axis duplication inhibitor， CHD-8， duplin， helicase with SNF2 domain 1， HELSNF1。

3.2 功能背景

CHD8是CHD蛋白家族中功能研究較為深入的一員，主要參與ATP依賴的染色質(zhì)重塑。其關(guān)鍵生物學(xué)功能包括：

染色質(zhì)重塑與轉(zhuǎn)錄調(diào)控：CHD8通過(guò)其ATP酶活性水解ATP，改變核小體位置或組成，從而調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。它既可以作為轉(zhuǎn)錄激活因子，也可作為抑制因子，具體取決于相互作用蛋白及啟動(dòng)子環(huán)境。

wnt信號(hào)通路調(diào)控：CHD8與duplin相互作用，而duplin可抑制wnt/β-catenin信號(hào)通路。通過(guò)這一機(jī)制，CHD8參與細(xì)胞增殖、分化及胚胎發(fā)育。

CTCF相互作用：CHD8與絕緣子蛋白CTCF結(jié)合，有助于建立和維持拓?fù)潢P(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域（TAD）邊界，影響基因組三維構(gòu)象。

神經(jīng)發(fā)育與疾病：CHD8基因功能喪失性突變是自閉癥譜系障礙（ASD）中最常見(jiàn)的單基因致病原因之一（其基因符號(hào)AUTS18即源于此）?；颊叱０橛芯辴畸形、胃腸道功能障礙及睡眠障礙。CHD8也被報(bào)道為一種腫瘤抑制因子，在多種癌癥中表達(dá)下調(diào)或突變。

四、抗體制備與純化

4.1 免疫原及表位定位

本抗體采用的免疫原對(duì)應(yīng)人CHD8蛋白序列中第600–650位氨基酸之間的區(qū)域。經(jīng)精確定位，A301-224A所識(shí)別的表位位于第325–350氨基酸區(qū)間（參考序列NP_065971.2）。注意：說(shuō)明書在“免疫原"一欄寫的是“Between 600 and 650"，但在“表位"說(shuō)明中寫的是“between residue 325 and 350"。存在不一致。通常以表位說(shuō)明為準(zhǔn)（第325–350位）。這里按照提供內(nèi)容如實(shí)呈現(xiàn)：免疫原為第600–650區(qū)域，但實(shí)際識(shí)別的表位在325–350。這可能是由于免疫原使用了較長(zhǎng)片段（600–650），但主要抗原決定簇落在325–350區(qū)域。在文章中如實(shí)說(shuō)明即可。

4.2 純化方法

抗體通過(guò)抗原親和層析純化。將針對(duì)CHD8特異性表位（第325–350位）的多肽固定于固相載體，使抗血清中的特異性IgG結(jié)合于該表位，經(jīng)洗脫獲得高純度抗體。此法確保最終產(chǎn)品中只保留識(shí)別目標(biāo)表位的抗體分子，顯著降低非特異性背景，尤其適合IHC等高要求應(yīng)用。

4.3 濃度測(cè)定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定，以1 mg/mL IgG在280 nm波長(zhǎng)下的吸光度（A280）為1.4作為標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)測(cè)濃度為1000 µg/mL。

4.4 緩沖液與防腐劑

抗體儲(chǔ)存于Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液（pH 7–8），其中含0.09%疊d化鈉作為防腐劑。注意：疊d化鈉有毒，操作時(shí)請(qǐng)佩戴防護(hù)手套。若用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)或需要疊氮化物敏感的細(xì)胞培養(yǎng)體系，請(qǐng)使用前通過(guò)透析或超濾去除。

五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

收到產(chǎn)品后，請(qǐng)將抗體置于2–8°C條件下儲(chǔ)存。切勿冷凍，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性聚集、效價(jià)下降。在推薦的儲(chǔ)存條件下，自收貨之日起1年內(nèi)可保持穩(wěn)定。若需長(zhǎng)期保存，可分裝后凍存于-20°C或-80°C，但分裝時(shí)應(yīng)避免稀釋（高濃度抗體抗凍能力較強(qiáng)），且每份建議一次用完，避免反復(fù)凍融。

六、參考文獻(xiàn)（部分）：

Thompson BA， et al. (2008) *Mol Cell Biol* 28: 4967–4979.

Nishiyama M， et al. (2009) *Genes Dev* 23: 800–805.

Bernier R， et al. (2014) *Cell* 158: 263–276.

注：本產(chǎn)品僅限研究使用，不得用于診斷或治療。用戶應(yīng)自行驗(yàn)證抗體在其特定實(shí)驗(yàn)體系中的適用性。以上信息覆蓋了A301-224A抗體的全部規(guī)格、應(yīng)用參數(shù)及背景知識(shí)，使用者可據(jù)此快速建立實(shí)驗(yàn)方案，獲得可靠且可重復(fù)的檢測(cè)結(jié)果。