一、產(chǎn)品概述

山羊抗兔IgG多克隆抗體（貨號(hào)：A120-101P）由艾美捷Bethyl Laboratories推出，特異性識(shí)別兔免疫球蛋白G（IgG）的重鏈和輕鏈（Heavy and Light Chain，H+L）?？贵w經(jīng)抗原親和純化，以未偶聯(lián)（Unconjugated）的全I(xiàn)gG形式提供，濃度標(biāo)準(zhǔn)化為1 mg/ml。該抗體適用于酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、免疫組織化學(xué)（IHC）和免疫印跡（WB）等多種檢測平臺(tái)，可作為兔源一抗的通用型二抗檢測試劑，亦可用于直接包被ELISA板捕獲兔IgG。產(chǎn)品原產(chǎn)于美國，2–8°C儲(chǔ)存條件下有效期長達(dá)2年（自收貨之日起計(jì)算），具有良好的實(shí)驗(yàn)室?guī)齑娣€(wěn)定性。

二、核心技術(shù)規(guī)格

參數(shù)項(xiàng) | 具體規(guī)格

靶標(biāo) | 兔IgG（重鏈和輕鏈）

反應(yīng)種屬 | 兔

適用實(shí)驗(yàn) | ELISA、ICC、IHC、WB

宿主 | 山羊

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 全I(xiàn)gG

同種型 | 山羊IgG

偶聯(lián)物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬來源 | 兔

濃度 | 1 mg/ml

儲(chǔ)存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 2年

緩沖液 | 磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.09%疊d化鈉

特異性說明：通過免疫電泳和ELISA驗(yàn)證，本抗體與兔IgG重鏈以及兔其他免疫球蛋白（IgA、IgM等）共有的輕鏈均有反應(yīng)。未檢測到針對(duì)非免疫球蛋白血清蛋白的抗體。該抗體可能與其他物種的IgG發(fā)生交叉反應(yīng)（詳見下文）。

三、產(chǎn)品制備與質(zhì)量控制

3.1 純化工藝

抗體采用親和層析法制備：將兔IgG抗原共價(jià)偶聯(lián)至瓊脂糖凝膠珠上，裝柱后使山羊抗血清過柱，特異性IgG被吸附；充分洗滌去除未結(jié)合蛋白后，以低pH緩沖液洗脫目標(biāo)抗體，經(jīng)中和、透析及濃縮，最終置換至含防腐劑的PBS緩沖液中。

3.2 濃度測定

免疫球蛋白濃度通過比爾-朗伯定律確定：1 mg/ml純化IgG在280 nm波長處的吸光度（A280）為1.4。本產(chǎn)品批次實(shí)測A280值經(jīng)計(jì)算換算為1 mg/ml濃度，確保批間一致性。

3.3 純度驗(yàn)證

抗原親和純化工藝可去除山羊血清中絕大多數(shù)非特異性蛋白，包括白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白及其他非IgG免疫球蛋白。經(jīng)SDS-PAGE和考馬斯亮藍(lán)染色評(píng)估，抗體純度典型值≥95%。功能性驗(yàn)證通過ELISA和免疫電泳完成，確認(rèn)僅與兔IgG及輕鏈反應(yīng)，不與兔非免疫球蛋白血清成分結(jié)合。

四、推薦應(yīng)用與稀釋方案

以下稀釋范圍為起始推薦值。由于不同實(shí)驗(yàn)體系（樣本類型、抗原豐度、檢測系統(tǒng)靈敏度）存在差異，用戶需根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行優(yōu)化。

應(yīng)用 | 推薦稀釋范圍 | 備注

ELISA（檢測用二抗） | 1:1,000 – 1:30,000 | 配合HRP/AP標(biāo)記的鏈霉親和素或直接使用酶標(biāo)二抗

ELISA（包被用捕獲抗體） | 1:100 – 1:500 | 用于包被ELISA板以捕獲兔IgG標(biāo)準(zhǔn)品或樣本

免疫印跡（WB） | 1:1,000 – 1:30,000 | 建議使用5%脫脂奶粉或BSA封閉及稀釋

免疫組織化學(xué)（IHC） | 1:200 – 1:2,000 | 適用于福爾馬林固定、石蠟包埋或冰凍切片

疫細(xì)胞化學(xué)（ICC） | 1:200 – 1:2,000 | 適用于細(xì)胞爬片或培養(yǎng)細(xì)胞

注意：本公司實(shí)驗(yàn)室尚未對(duì)所有列出應(yīng)用進(jìn)行逐一驗(yàn)證。上述稀釋范圍基于文獻(xiàn)及客戶反饋整理，用戶需自行優(yōu)化。

五、交叉反應(yīng)信息與使用注意事項(xiàng)

5.1 預(yù)期反應(yīng)性

強(qiáng)反應(yīng)：兔IgG（重鏈和輕鏈）、兔IgA、兔IgM（通過輕鏈識(shí)別）

可能交叉反應(yīng)：與其他物種（如小鼠、大鼠、人、山羊等）的IgG可能存在不同程度的交叉反應(yīng)，原因在于免疫球蛋白輕鏈（尤其是κ鏈）的保守性。

無非特異性反應(yīng)：未檢測到針對(duì)兔白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等其他血清蛋白的抗體。

5.2 應(yīng)用指導(dǎo)

作為二抗使用：

本抗體未標(biāo)記任何酶或熒光基團(tuán)，需配合標(biāo)記的鏈霉親和素或使用標(biāo)記的山羊抗雞/抗驢等三抗進(jìn)行信號(hào)放大。更常見的做法是直接購買本抗體的HRP、AP、生物素或熒光標(biāo)記版本（可向供應(yīng)商咨詢定制）。

若需用于常規(guī)WB檢測，建議使用HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG（H+L） 產(chǎn)品；本未偶聯(lián)版本更適用于構(gòu)建自行標(biāo)記體系或ELISA捕獲步驟。

用于ELISA捕獲：

將本抗體以1:100–1:500稀釋于包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液，pH 9.6），4°C過夜包被。洗滌封閉后，加入含兔IgG的標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，隨后用HRP標(biāo)記的抗兔IgG（不同宿主）或直接使用酶標(biāo)記的蛋白A/G進(jìn)行檢測。

注意疊d化鈉的影響：

緩沖液含0.09%疊d化鈉，該濃度可有效抑制微生物污染。但疊d化鈉會(huì)不可逆抑制辣根過氧化物酶（HRP）活性。若計(jì)劃將本抗體直接標(biāo)記HRP，需在標(biāo)記前通過透析或凝膠過濾去除疊d化鈉。若將本抗體用于HRP標(biāo)記二抗的檢測體系（例如作為未標(biāo)記的捕獲抗體），疊d化鈉在洗滌步驟中被移除，無影響。

六、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存條件：2–8°C，嚴(yán)禁冷凍。反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體聚集及活性下降。

有效期：自收貨之日起2年。在有效期內(nèi)，抗體活性保持穩(wěn)定。建議分裝保存以避免反復(fù)開啟污染。

運(yùn)輸條件：濕冰運(yùn)輸（2–8°C）。收到后請立即存放于2–8°C。

總結(jié)

本山羊抗兔IgG（H+L）親和純化抗體提供1 mg/ml標(biāo)準(zhǔn)濃度，經(jīng)抗原親和純化確保高特異性和低背景。2–8°C儲(chǔ)存條件下有效期長達(dá)2年，適合實(shí)驗(yàn)室常規(guī)備存。產(chǎn)品適用于ELISA、ICC、IHC和WB四大應(yīng)用領(lǐng)域，既可作檢測用二抗，亦可作ELISA捕獲抗體。由于未偶聯(lián)標(biāo)記，用戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要自行偶聯(lián)HRP、生物素、熒光素等，或直接用于非標(biāo)記檢測體系。請注意疊d化鈉對(duì)HRP的抑制作用及與其他物種IgG的可能交叉反應(yīng)，建議在正式實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行必要的對(duì)照測試。