本抗體為艾美捷Bethyl Laboratories推出的雞源多克隆抗體（貨號：A190-118A），特異性識別V5標簽肽段序列（GKPIPNPLLGLDST）。經(jīng)抗原親和純化，提供完整IgG分子形式，未偶聯(lián)任何標記物（Unconjugated），濃度為1 mg/mL。適用于Western blot、ELISA、免疫細胞化學(xué)和免疫沉淀等常見標簽檢測場景。

產(chǎn)品規(guī)格與理化參數(shù)

參數(shù)項目 詳細規(guī)格

目標抗原 V5標簽（氨基酸殘基95–108）

反應(yīng)種屬 標簽通用（重組蛋白/融合蛋白）

宿主來源 雞

克隆類型 多克隆

抗體形式 完整IgG

亞型 IgG

偶聯(lián)物 無

純度 抗原親和純化

濃度 1 mg/mL

保存條件 2–8 °C

有效期限 自收貨起1年

緩沖體系 含0.09%疊d化鈉的磷酸鹽緩沖液（PBS）

濃度測定依據(jù)：采用比爾定律（Beer’s Law），標準為1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光值（A280）為1.4。

抗原信息與標簽優(yōu)勢

V5標簽序列：  

GKPIPNPLLGLDST（14個氨基酸殘基）  

該序列來源于猴病毒5（Simian Virus 5）RNA聚合酶α亞基的第95–108位氨基酸。

V5標簽核心特點：

分子量?。s1.5 kDa），對融合蛋白的天然構(gòu)象、表達、定位及功能干擾極低

廣泛應(yīng)用于Western blot、免疫沉淀、免疫熒光及蛋白純化

與c-Myc、HA、Flag等常用標簽無序列同源性，可進行多重標記檢測

免疫原制備：  

將合成的V5標簽肽段（GKPIPNPLLGLDST）與匙孔血藍蛋白（KLH）偶聯(lián)，免疫雞只。固相支持物上固定該肽段，通過親和層析分離特異性抗體。

生產(chǎn)與純化流程

1. 免疫方案：使用KLH偶聯(lián)的合成肽段免疫雞，誘導(dǎo)產(chǎn)生多克隆抗血清  

2. 血清處理：固相吸附處理，去除與載體蛋白或其他非特異性序列的交叉反應(yīng)  

3. 親和純化：將V5標簽肽段固定在層析基質(zhì)上，從抗血清中特異性捕獲抗V5抗體  

4. 濃度標定：A280法，1 mg/mL對應(yīng)吸光值1.4  

5. 質(zhì)控放行：經(jīng)Western blot和ELISA雙重驗證與V5標簽陽性蛋白的特異性識別能力

適用范圍與推薦稀釋/使用比例

重要提示：并非所有列出的應(yīng)用均已由生產(chǎn)實驗室逐一驗證。s次使用前建議進行梯度稀釋預(yù)實驗，以確定最佳工作濃度。

應(yīng)用技術(shù) 推薦使用范圍 備注

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA） 1:1,000 – 1:30,000 包被板適用：1:100 – 1:500

免疫細胞化學(xué)（ICC） 1:100 – 1:400 適用于細胞染色

免疫沉淀（IP） 1 – 4 µg抗體/毫克裂解液 按蛋白質(zhì)量計算抗體用量

蛋白質(zhì)印跡（WB） 1:1,000 – 1:30,000 詳見下方WB操作參數(shù)

Western blot 標準操作參數(shù)（由生產(chǎn)實驗室測試確認）：

封閉液與抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜（4°C或室溫） —— 推薦過夜以增強低豐度標簽信號

推薦二抗：驢抗雞IgG（重鏈+輕鏈）抗體，貨號 A50-101P（或其他公司等效產(chǎn)品）

應(yīng)用選擇建議：

高豐度融合蛋白WB檢測：起始稀釋度1:5,000–1:10,000

低豐度或瞬轉(zhuǎn)表達樣本W(wǎng)B：1:1,000–1:2,000

ELISA夾心法檢測：檢測抗體使用1:5,000–1:20,000；包被捕獲抗體使用1:100–1:500

ICC細胞染色：1:200起始，根據(jù)信號強度和背景調(diào)整（范圍1:100–1:400）

IP實驗：對于1 mg細胞裂解物，推薦2 µg抗體；如目標蛋白表達豐度極低，可增加至4 µg。

操作注意事項與優(yōu)化建議

通用注意事項

防腐劑影響：緩沖液中含有0.09%疊d化鈉，可能抑制HRP活性。若后續(xù)偶聯(lián)HRP標記二抗進行檢測，建議在使用前通過透析或超濾去除疊d化鈉

避免冷凍：本品應(yīng)始終保存于2–8°C。冷凍會導(dǎo)致抗體蛋白變性、聚集及活性喪失

無菌操作：取用抗體時應(yīng)使用無菌槍頭，避免污染整管

針對不同應(yīng)用的優(yōu)化

Western blot：

轉(zhuǎn)印后膜封閉：5%脫脂牛奶-TBST，室溫1小時

一抗稀釋液同樣使用5%牛奶-TBST（與封閉液一致，降低背景）

洗滌：TBST洗滌3次，每次10分鐘

二抗選擇：推薦雞特異性二抗（如驢抗雞IgG-HRP），避免與一抗宿主交叉

免疫沉淀：

裂解液選擇：使用非變性裂解液（如RIPA緩沖液或NP-40裂解液）保存蛋白-標簽相互作用

抗體固定化：可直接將抗體與Protein A/G瓊脂糖珠預(yù)孵育，也可采用抗體先與裂解液孵育后再加入磁珠/瓊脂糖珠

洗滌嚴格度：至少洗滌4次，每次用500 µL裂解液，減少非特異性吸附

洗脫：使用2× SDS上樣緩沖液煮沸5分鐘

免疫細胞化學(xué)：

固定：推薦4%多聚甲醛固定15–20分鐘（室溫）

透化：使用0.1–0.25% Triton X-100處理5–10分鐘（針對細胞內(nèi)抗原）

封閉：5%正常驢血清或3% BSA-PBS，室溫30分鐘

一抗孵育：4°C過夜或室溫2小時

洗滌：PBS洗滌3次，每次5分鐘

ELISA：

包被：可直接包被V5標簽融合蛋白，或包被捕獲抗體進行夾心ELISA

封閉：2% BSA或5%脫脂牛奶-PBS

檢測：使用酶標二抗（推薦抗雞IgG-HRP），TMB顯色

儲存與穩(wěn)定性管理

儲存條件：

溫度：2–8°C （嚴禁冷凍）

容器：按單次使用量分裝可減少反復(fù)開管污染風(fēng)險，但分裝后仍需存放于2–8°C（不推薦-20°C）

避光：無需特殊避光，但避免強光直射

穩(wěn)定性驗證：

有效期：自收貨之日起12個月

防腐劑：0.09%疊d化鈉抑制細菌生長，防止長期儲存中微生物污染

活性監(jiān)控：若超過有效期使用，建議重新進行效價測定（如ELISA終點稀釋）