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本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的多克隆抗體(貨號:A10-118P),特異性識別牛免疫球蛋白G(IgG)的重鏈表位。宿主選用綿羊,經(jīng)抗原親和純化獲得完整IgG分子,未偶聯(lián)任何標記物(Unconjugated),濃度為1 mg/mL。
產(chǎn)品規(guī)格與理化參數(shù)
參數(shù)項目 詳細規(guī)格
目標抗原 牛IgG重鏈
反應(yīng)種屬 牛
宿主來源 綿羊
克隆類型 多克隆
抗體形式 完整IgG
亞型 IgG
偶聯(lián)物 無
純度 抗原親和純化
抗原物種 牛
工作濃度 1 mg/mL
保存條件 2–8 °C
有效期限 自收貨起1年
緩沖體系 含0.09%疊d化鈉的磷酸鹽緩沖液(PBS)
濃度測定依據(jù):采用比爾定律(Beer’s Law)計算免疫球蛋白濃度,標準為1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光值(A280)為1.4。
生產(chǎn)純化流程:
1. 固相吸附處理抗血清,確保類別特異性
2. 使用瓊脂糖珠偶聯(lián)的抗原進行親和層析分離
3. 經(jīng)免疫電泳和ELISA雙重驗證,本品與牛IgG反應(yīng)具有特異性
適用范圍與推薦稀釋比例
重要提示:并非所有列出的應(yīng)用均已由生產(chǎn)實驗室逐一驗證。s次使用建議進行梯度稀釋預(yù)實驗。
應(yīng)用技術(shù) 推薦稀釋范圍 備注
酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA) 1:1,000 – 1:30,000 包被板適用:1:100 – 1:500
免疫細胞化學(xué)(ICC) 1:200 – 1:2,000 —
免疫組織化學(xué)(IHC) 1:200 – 1:2,000 —
蛋白質(zhì)印跡(WB) 1:1,000 – 1:30,000 —
應(yīng)用選擇建議:
高靈敏度檢測(WB/ELISA):推薦起始稀釋度1:5,000,根據(jù)信號強度向上或向下調(diào)整
細胞或組織染色(ICC/IHC):起始稀釋度1:500較為穩(wěn)妥,背景過高時可提高至1:1,000
ELISA包被:使用高濃度區(qū)間(1:100–1:500)確保抗原捕獲效率
反應(yīng)特異性與交叉反應(yīng)說明
特異性驗證:
經(jīng)免疫電泳和ELISA雙重確認,本抗體特異性識別牛IgG分子
針對重鏈設(shè)計,去除與輕鏈的反應(yīng)性,避免輕鏈交叉干擾
可能存在的交叉反應(yīng):
本品可能與其他物種的IgG發(fā)生交叉反應(yīng)
若用于非牛樣本(如羊、馬、豬等),建議預(yù)先進行交叉反應(yīng)測試
設(shè)計原理:
IgG是血液/血漿中主要的免疫球蛋白,功能包括中和毒素、激活補體、固定病原體、誘導(dǎo)調(diào)理作用和細胞介導(dǎo)的細胞毒性??怪劓溈贵w專門識別IgG分子的重鏈區(qū)域,避免與輕鏈非特異性結(jié)合,從而在多重染色或輕鏈表達紊亂樣本中提供更準確的檢測結(jié)果。
儲存與穩(wěn)定性管理
儲存條件:
溫度:2–8 °C(切勿冷凍,冷凍會導(dǎo)致蛋白變性及抗體活性喪失)
容器:分裝保存可減少反復(fù)取用造成的污染風險
避光:無需特殊避光,但建議存放于原裝瓶或密閉管中
穩(wěn)定性保障:
有效期:自收貨之日起12個月
防腐劑:緩沖液內(nèi)含0.09%疊d化鈉,有效抑制微生物生長
避免反復(fù)凍融:如須長期保存,建議分裝后置-20°C(但需注意部分活性可能損失,以2–8°C為s選)
操作注意事項
1. 稀釋液選擇:推薦使用含1% BSA或5%脫脂牛奶的PBS/Tween-20作為稀釋液,降低非特異性吸附
2. 陽性對照:建議使用牛血清或純化牛IgG作為陽性對照樣本
3. 陰性對照:使用同型對照抗體(綿羊IgG)或預(yù)吸附抗體評估背景水平
4. 孵育條件:室溫1–2小時或4°C過夜均可,低溫過夜通??色@得更高信噪比
5. 洗滌緩沖液:PBST(含0.05% Tween-20)推薦洗滌3–5次,每次5分鐘
安全信息:
緩沖液中含有疊d化鈉,作為防腐劑使用時濃度較低(0.09%),但仍具毒性。操作時佩戴手套,避免接觸皮膚或粘膜。廢液應(yīng)按實驗室危險化學(xué)品規(guī)定處理。
典型實驗流程示意:
封閉 → 一抗(本品,按推薦稀釋度)→ 洗滌 → 二抗(抗綿羊IgG標記物)→ 檢測
本品適用于牛免疫球蛋白相關(guān)研究、牛源抗體檢測、疫苗效價評估、獸醫(yī)診斷以及基礎(chǔ)免疫學(xué)中IgG重鏈的功能分析。
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