產(chǎn)品核心規(guī)格

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的抗BubR1抗體（貨號(hào)A300-995A）是一款靶向紡錘體檢查點(diǎn)激酶BubR1（又稱BUB1B）的兔多克隆抗體。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以Whole IgG形式提供，未偶聯(lián)標(biāo)記，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）檢測(cè)人源樣本。關(guān)鍵參數(shù)匯總?cè)缦拢?/span>

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶點(diǎn) BubR1 / BUB1B（紡錘體檢查點(diǎn)絲氨酸/蘇氨酸激酶B）

反應(yīng)性 人

應(yīng)用 IHC、IP、WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

濃度 200 µg/ml

純化方式 抗原親和純化

同種型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

免疫原與表位特異性

該抗體通過(guò)針對(duì)人BubR1蛋白N末端區(qū)域的特異性表位進(jìn)行親和純化獲得。具體而言，識(shí)別表位位于第1位至第50位殘基之間，參考序列編號(hào)基于NP_001202.3（GeneID 701）。免疫原為人BubR1蛋白的該區(qū)域。

技術(shù)要點(diǎn)：BubR1的N末端區(qū)域（1-50位）高度保守，包含參與蛋白-蛋白相互作用的關(guān)鍵基序。靶向該區(qū)域的抗體可特異性識(shí)別全長(zhǎng)BubR1，且因該區(qū)域在Bub1同源蛋白中差異較大，交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)較低。生產(chǎn)中采用固相固定化表位親和純化，確保高特異性和低背景?？贵w濃度通過(guò)比爾定律測(cè)定，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4為標(biāo)準(zhǔn)。

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存條件：2 - 8°C

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液組成：Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉（防腐劑）

應(yīng)用與實(shí)驗(yàn)方案

通用方法

所有免疫印跡實(shí)驗(yàn)均使用5% Milk-TBST作為封閉液和抗體稀釋液。一抗孵育條件為過(guò)夜（推薦4°C搖動(dòng)孵育）。

檢測(cè)體系

實(shí)驗(yàn)類型 推薦檢測(cè)抗體

細(xì)胞裂解液Western Blot 羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀物Western Blot 抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）

推薦工作濃度

應(yīng)用 推薦稀釋度/用量

免疫組化（IHC） 1:100 - 1:500

免疫沉淀（IP） 6 µg/mg裂解物

免疫印跡（WB） 1:2000 - 1:10000

詳細(xì)實(shí)驗(yàn)提示：

免疫組化（IHC）：推薦使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進(jìn)行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)（適用于福爾馬林固定石蠟包埋組織切片）。具體步驟：切片脫蠟水化后，將切片置于Tris-EDTA修復(fù)液（例如10 mM Tris Base, 1 mM EDTA, 0.05% Tween-20, pH 9.0）中，高壓或微波加熱至沸騰并維持10-15分鐘，自然冷卻后封閉。一抗推薦稀釋比1:100-1:500，4°C孵育過(guò)夜。建議設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照（如HeLa細(xì)胞或扁桃體組織）和陰性對(duì)照（兔IgG或省略一抗）。

免疫沉淀（IP）：按照6 µg抗體/mg總蛋白裂解物的比例加入抗體。推薦使用非變性裂解液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris-HCl pH 7.4及蛋白酶抑制劑）制備裂解物。將抗體與裂解物在4°C旋轉(zhuǎn)孵育2-4小時(shí)或過(guò)夜，然后加入Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠，繼續(xù)孵育1-2小時(shí)。洗滌后，用SDS上樣緩沖液洗脫免疫復(fù)合物用于WB分析。

免疫印跡（WB）：推薦起始稀釋比為1:2000。若信號(hào)過(guò)強(qiáng)可提高至1:5000-1:10000；若信號(hào)弱可降至1:1000。BubR1分子量約為120 kDa，在不同細(xì)胞系中可能出現(xiàn)多條帶（可能由于磷酸化修飾或剪切變異），建議使用HeLa或HEK293T細(xì)胞裂解物作為陽(yáng)性對(duì)照。轉(zhuǎn)膜后使用5% Milk-TBST封閉1小時(shí)，一抗4°C孵育過(guò)夜，二抗室溫孵育1小時(shí)，最后用ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。

IP后WB檢測(cè)：建議使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體（配合5%正常豬血清封閉）進(jìn)行檢測(cè)。BubR1分子量~120 kDa，與兔IgG重鏈（~55 kDa）無(wú)重疊，但輕鏈特異性HRP可排除可能的重鏈降解產(chǎn)物干擾，同時(shí)降低背景信號(hào)。

靶點(diǎn)背景：BubR1 / BUB1B

分子功能

BubR1（亦稱BUB1B、hBUBR1、MAD3L）是細(xì)胞周期檢查點(diǎn)激酶，屬于紡錘體檢查點(diǎn)（也稱有絲分裂檢查點(diǎn)）核心組件。紡錘體檢查點(diǎn)的功能是確保所有復(fù)制后的染色單體與功能性的雙極紡錘體正確連接之前，細(xì)胞不進(jìn)入后期（anaphase），從而防止染色體錯(cuò)誤分離和非整倍體形成。

有絲分裂檢查點(diǎn)復(fù)合物

BubR1與其他檢查點(diǎn)蛋白共同組成有絲分裂檢查點(diǎn)復(fù)合物（MCC），該復(fù)合物包含Bub3、Mad2和Cdc20。BubR1在該復(fù)合物中的作用是抑制后期促進(jìn)復(fù)合物/環(huán)體（APC/C）的活性。APC/C是泛素連接酶，負(fù)責(zé)標(biāo)記細(xì)胞周期蛋白（Cyclin B）和securin等蛋白以促進(jìn)降解，從而啟動(dòng)染色體分離。當(dāng)APC/C被BubR1抑制時(shí)，細(xì)胞周期停留在有絲分裂中期，直至所有染色體完成正確排列。

同源關(guān)系

BubR1被認(rèn)為是Bub1的旁系同源物（paralog）。兩者均含有保守的激酶結(jié)構(gòu)域，但在底物特異性和調(diào)控機(jī)制上有所區(qū)別。BubR1缺乏部分N末端區(qū)域，但仍具有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性，在檢查點(diǎn)信號(hào)放大中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

別名

Bub1A、BUB1B（mitotic checkpoint serine/threonine kinase）、BUB1beta、BUBR1、budding uninhibited by benzimidazoles 1 homolog beta、hBUBR1、MAD3/BUB1-related protein kinase、MAD3L、mitotic checkpoint kinase MAD3L、MVA1、Protein SSK1、SSK1