產(chǎn)品核心規(guī)格

由艾美捷Bethyl Laboratories抗JMJD2A抗體（貨號A300-861A）是一款靶向Jumonji結(jié)構(gòu)域組蛋白去甲基化酶JMJD2A（又稱KDM4A）的兔多克隆抗體。該抗體經(jīng)抗原親和純化，以Whole IgG形式提供，未偶聯(lián)標記，適用于免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）檢測人源及小鼠來源樣本。關(guān)鍵參數(shù)匯總?cè)缦拢?/span>

參數(shù) 詳細信息

靶點 JMJD2A / KDM4A（賴氨酸特異性去甲基化酶4A）

反應性 人、小鼠

應用 IP、WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

濃度 200 µg/ml

純化方式 抗原親和純化

同種型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

免疫原與表位特異性

該抗體通過針對人JMJD2A蛋白C末端區(qū)域的特異性表位進行親和純化獲得。具體而言，識別表位位于第1010位殘基與C末端（第1064位殘基）之間，參考序列編號基于NP_055478.1（GeneID 9682）。免疫原為人JMJD2A蛋白的該區(qū)域。

技術(shù)要點：C末端區(qū)域包含JMJD2A所擁有的Tudor結(jié)構(gòu)域（位于第9121040位附近），該結(jié)構(gòu)域參與識別組蛋白修飾（如H3K4me3和H4K20me3）并調(diào)控去甲基化酶活性。靶向此區(qū)域的抗體可特異性檢測全長JMJD2A，且與其他Jumonji家族成員（如JMJD2C、JMJD2D）的交叉反應風險較低。生產(chǎn)中采用固相固定化表位親和純化，確保高特異性和低背景。

儲存與穩(wěn)定性

儲存條件：2-8°C

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液組成：Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉（防腐劑）

濃度測定：采用比爾定律，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4為標準

應用與實驗方案

通用方法

所有免疫印跡實驗均使用5% MilkTBST作為封閉液和抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜（推薦4°C搖動孵育）。

檢測體系

實驗類型 推薦檢測抗體

細胞裂解液Western Blot 羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120101P）

免疫沉淀物Western Blot 抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100020）

推薦工作濃度

應用 推薦稀釋度/用量

免疫沉淀（IP） 6 µg/mg裂解物

免疫印跡（WB） 1:1000  1:5000

實驗提示：

WB起始稀釋：建議從1:1000開始，根據(jù)信號強度調(diào)整至1:20001:5000。JMJD2A在多數(shù)細胞系中表達水平中等，若使用高靈敏度化學發(fā)光底物可適當提高稀釋比。

IP用量計算：按照6 µg抗體/mg總蛋白裂解物的比例加入抗體。推薦裂解液使用RIPA緩沖液（含蛋白酶抑制劑），4°C孵育24小時或過夜后，用Protein A/G磁珠捕獲。

IP后WB檢測：必須使用抗兔IgG輕鏈HRP抗體（而非抗重輕鏈抗體），以避免IgG重鏈信號（約55 kDa）干擾JMJD2A目標條帶的檢測。JMJD2A分子量約為120130 kDa，重鏈信號位于5055 kDa區(qū)域，通常不直接重疊，但輕鏈特異性檢測可進一步降低背景。

別名

JHDM3A、jmjC domaincontaining histone demethylation protein 3A、JMJD2、JMJD2A、jumonji C domaincontaining histone demethylase 3A、jumonji domain containing 2、jumonji domain containing 2A、jumonji domaincontaining protein 2A、lysine (K)specific demethylase 4A、lysinespecific demethylase 4A、TDRD14A、tudor domain containing 14A

使用注意事項

1.防腐劑安全：緩沖液含0.09%疊d化鈉，有毒，操作時需佩戴手套和護目鏡，避免皮膚接觸。疊d化鈉可能抑制HRP活性，若計劃進行HRP偶聯(lián)二抗檢測，需確保在二抗稀釋及洗滌步驟中充分去除殘留。

2.稀釋優(yōu)化：不同細胞系或組織中JMJD2A表達水平差異較大。例如，HeLa、HEK293T等細胞中表達較高，而部分正常組織表達較低。建議進行預實驗梯度稀釋（1:500、1:1000、1:2000、1:5000）確定最佳信噪比。

3.分子量確認：JMJD2A的預測分子量約為120 kDa，但由于翻譯后修飾（磷酸化、泛素化等），實際遷移位置可能在110140 kDa之間。建議同時使用陽性對照裂解物（如HeLa全細胞裂解物）驗證條帶位置。

4.IP后WB檢測：雖然JMJD2A分子量（~120 kDa）與兔IgG重鏈（~55 kDa）無重疊，但輕鏈特異性HRP抗體可消除由重鏈引起的非特異背景，尤其在分析IP洗脫液中可能共沉淀的輕鏈降解片段時更為必要。推薦添加5%正常豬血清以封閉非特異性結(jié)合。

5.交叉反應性：已驗證人、小鼠反應性。經(jīng)序列比對，該C末端表位區(qū)域在小鼠JMJD2A（NP_001276468.1）中具有高度同源性。對其他Jumonji家族成員的潛在交叉反應未經(jīng)驗證，建議通過敲低/敲除樣本進行特異性確認。

產(chǎn)品優(yōu)勢總結(jié)

高特異性表位：靶向C末端Tudor結(jié)構(gòu)域附近區(qū)域（10101064位），區(qū)別于靶向催化域的抗體，適用于區(qū)分JMJD2A與其它KDM4亞家族成員。

雙種屬驗證：同時識別人類和小鼠JMJD2A，便于跨物種實驗比較。

寬工作范圍：WB稀釋比1:10001:5000，兼容不同表達豐度樣本的檢測。

親和純化IgG：200 µg/ml高濃度，經(jīng)抗原親和純化去除血清蛋白和非特異性抗體，確保低背景。

長期穩(wěn)定：28°C儲存，1年有效期，無需分裝冷凍，避免反復凍融帶來的效價損失。

研究應用方向

該抗體適用于以下研究領(lǐng)域：

組蛋白去甲基化酶在表觀遺傳調(diào)控中的功能研究

JMJD2A與pRb/HDAC復合物在細胞周期及腫瘤發(fā)生中的作用

E2F調(diào)控啟動子的轉(zhuǎn)錄抑制機制

DNA損傷修復、細胞分化及干細胞干性維持

小分子抑制劑（如JMJD2A抑制劑）的效果評價

該抗體為解析JMJD2A在染色質(zhì)重塑、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及腫瘤表觀遺傳學中的功能提供了穩(wěn)定、特異性的工具。