由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗體為兔源多克隆抗體（貨號：A300-000A），特異性識別人BRCA1蛋白的C末端區(qū)域（第1813位氨基酸至C末端）。經(jīng)抗原親和純化，提供完整IgG分子形式，未偶聯(lián)任何標記物（Unconjugated），濃度為1000 µg/mL（1 mg/mL）。適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質印跡（WB）分析。

產(chǎn)品規(guī)格與理化參數(shù)

參數(shù)項目 詳細規(guī)格

目標抗原 BRCA1（乳腺癌易感基因1蛋白）

反應種屬 人

宿主來源 兔

克隆類型 多克隆

抗體形式 完整IgG

免疫原 第1813位至C末端（第1863位）之間的區(qū)域

亞型 IgG

偶聯(lián)物 無

純度 抗原親和純化

抗原物種 人

濃度 1000 µg/mL（1 mg/mL）

保存條件 2–8 °C

有效期限 自收貨起1年

緩沖體系 枸櫞酸-磷酸鹽-Tris緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

濃度測定依據(jù)：采用比爾定律（Beer’s Law），標準為1 mg/mL IgG在280 nm波長處的吸光值（A280）為1.4。

抗原背景：BRCA1蛋白的功能與結構

BRCA1（Breast Cancer Type 1 Susceptibility Protein）是一種重要的腫瘤抑制蛋白，其種系突變與女性乳腺癌和卵巢癌的易感性顯著相關。

核心功能：

參與DNA損傷應答與細胞周期檢查點調控，維持基因組完整性

調控多種相互作用蛋白的活性，涉及基因轉錄、轉錄抑制、蛋白磷酸化和泛素化等過程

作為E3泛素連接酶（RING finger蛋白53，RNF53）參與底物蛋白的泛素化修飾

本抗體的靶向優(yōu)勢：識別C末端區(qū)域（1813–1863），適用于檢測全長BRCA1以及保留C末端的截短突變體。該區(qū)域包含部分BRCT結構域，對功能研究具有重要意義。

別名信息：  

BRCA1、BRCC1、BROVCA1、FANCS、IRIS、PNCA4、PPP1R53、PSCP、RNF53、BRCAI、早期發(fā)作乳腺癌1、范可尼貧血互補群S。

生產(chǎn)與純化流程

1. 免疫原設計：選擇人BRCA1蛋白C末端區(qū)域（第1813–1863位氨基酸）的合成肽段或重組蛋白

2. 免疫方案：免疫兔，誘導產(chǎn)生多克隆抗血清

3. 親和純化：將表位特異性肽段固定在固相支持物上，從抗血清中親和捕獲特異性抗體

4. 濃度標定：A280法，1 mg/mL對應吸光值1.4

5. 緩沖體系：Tris-枸櫞酸-磷酸鹽緩沖液（pH 7–8），含0.09%疊d化鈉作為防腐劑

適用范圍與推薦使用條件

> 重要說明：本抗體的應用經(jīng)驗主要集中于免疫沉淀（IP）和Western blot（WB）。使用前建議根據(jù)樣本類型和表達豐度進行預實驗優(yōu)化。

應用技術 推薦使用條件 備注

免疫沉淀（IP） 6 µg抗體/毫克裂解液 按總蛋白質量計算抗體用量

蛋白質印跡（WB） 1:1,000 – 1:10,000 推薦使用3–8% Tris-醋酸酯凝膠

Western blot 詳細操作指南

標準WB流程（細胞裂解液）

以下參數(shù)已由生產(chǎn)實驗室驗證并推薦：

凝膠類型：3–8% Tris-醋酸酯梯度膠（BRCA1分子量較大，約220 kDa，低濃度凝膠有助于大分子量蛋白的有效分離和轉移）

封閉液：5% 脫脂牛奶-TBST

抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST（與封閉液一致）

一抗孵育：過夜（推薦4°C搖床孵育，或室溫過夜）

二抗：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈），貨號 A120-101P（或其他等效產(chǎn)品）

注意：對于細胞裂解液樣本的直接Western blot，使用識別重鏈和輕鏈的二抗即可。

免疫沉淀后Western blot的特殊要求

當本抗體用于免疫沉淀實驗，隨后對免疫沉淀復合物進行Western blot檢測時，由于洗脫產(chǎn)物中包含用于IP的抗體（來自兔）的重鏈（約55 kDa）和輕鏈（約25 kDa），這些抗體片段會被常規(guī)的二抗（抗兔IgG H+L）識別，可能在目標蛋白（BRCA1，約220 kDa）附近或輕鏈/重鏈位置產(chǎn)生干擾條帶。

優(yōu)化方案（生產(chǎn)實驗室推薦）：

1. 二抗選擇：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體（僅識別兔IgG輕鏈，避免識別重鏈）

2. 封閉液補充：在封閉緩沖液中加入5% 正常豬血清（貨號 S100-020），進一步降低非特異性背景

儲存與穩(wěn)定性

儲存條件：

溫度：2–8°C（嚴禁冷凍）

防腐劑：緩沖液含0.09%疊d化鈉，有效抑制微生物生長

分裝建議：如需長期保存，可無菌分裝為單次使用量，仍儲存于2–8°C（不推薦-20°C，可能引起蛋白聚集）

有效期：自收貨之日起12個月。超過有效期后使用，建議重新驗證效價。