產(chǎn)品概述

本產(chǎn)品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對(duì)人源BRD9蛋白（Bromodomain Containing 9）的兔多克隆抗體，貨號(hào)A303-781A。抗體以未標(biāo)記的完整IgG形式提供，適用于免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）應(yīng)用。該抗體經(jīng)抗原親和純化，特異性識(shí)別BRD9蛋白C端區(qū)域（第547-597位氨基酸殘基之間的表位），可用于檢測(cè)人源細(xì)胞中BRD9的表達(dá)水平、染色質(zhì)重塑復(fù)合物組分分析及同源重組相關(guān)研究。

核心參數(shù)

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶標(biāo) BRD9

反應(yīng)種屬 人

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原區(qū)域 第547位至C端（具體為第547-597位氨基酸，參考序列NP_076413.3）

同型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

濃度 1000 µg/ml

保存條件 2 8 °C

有效期 收貨后1年

緩沖液 Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊d化鈉

制備與純化

本抗體采用固相固定化技術(shù)，使用特異性針對(duì)BRD9蛋白的表位進(jìn)行親和純化。具體而言，識(shí)別表位定位于人源含溴結(jié)構(gòu)域蛋白9（BRD9）的第547至597位氨基酸區(qū)域（基于GeneID 65980，序列編號(hào)NP_076413.3），該區(qū)域靠近蛋白C端。免疫球蛋白濃度通過(guò)比爾定律測(cè)定，設(shè)定1 mg/mL IgG在A280波長(zhǎng)的吸光度為1.4。

應(yīng)用與推薦稀釋度

蛋白質(zhì)印跡（Western Blot, WB）

推薦稀釋度：1:2000 1:10,000

操作規(guī)范：

所有WB實(shí)驗(yàn)均使用5% Milk-TBST作為封閉液和抗體稀釋液

一抗孵育條件：過(guò)夜孵育

細(xì)胞裂解液的WB檢測(cè)：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號(hào)A120-101P）

免疫沉淀物的WB檢測(cè)：使用HRP標(biāo)記的抗兔IgG輕鏈抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號(hào)S100-020）

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推薦用量：6 µg抗體 / mg裂解液蛋白

特異性與靈敏度

本抗體經(jīng)親和純化，特異識(shí)別BRD9蛋白C端區(qū)域（第547-597位）。該表位遠(yuǎn)離N端的溴結(jié)構(gòu)域，避免了與其它含溴結(jié)構(gòu)域家族蛋白（如BRD2、BRD3、BRD4、BRD7等）的交叉反應(yīng)，提高了檢測(cè)的特異性。由于為多克隆抗體，可識(shí)別目標(biāo)抗原上的多個(gè)表位，具有較高的檢測(cè)靈敏度，適用于低豐度蛋白的檢測(cè)。

工作濃度優(yōu)勢(shì)

WB推薦稀釋范圍寬（1:2000-1:10,000），便于用戶根據(jù)樣本表達(dá)量和檢測(cè)體系進(jìn)行靈活優(yōu)化。IP推薦用量明確（6 µg/mg裂解液），降低了預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索的工作量。

儲(chǔ)存穩(wěn)定性

在2-8°C條件下可穩(wěn)定保存1年（自收貨之日起）。緩沖液中含0.09%疊d化鈉作為防腐劑，注意疊氮化物會(huì)抑制過(guò)氧化物酶活性，若計(jì)劃進(jìn)行HRP偶聯(lián)二抗檢測(cè)，需在實(shí)驗(yàn)前通過(guò)透析或脫鹽柱去除。

別名：

bromodomain-containing protein 9; LAVS3040; PRO9856; rhabdomyosarcoma antigen MU-RMS-40.8; sarcoma antigen NY-SAR-29

使用注意事項(xiàng)

1. 疊氮化物干擾：緩沖液中含有0.09%疊d化鈉。若下游實(shí)驗(yàn)使用HRP偶聯(lián)二抗進(jìn)行檢測(cè)，需注意疊氮化物會(huì)抑制HRP活性。建議在進(jìn)行WB或ELISA檢測(cè)前，通過(guò)PBS透析或使用脫鹽柱去除疊氮化物。

2. 抗體分裝：雖然產(chǎn)品在2-8°C條件下穩(wěn)定，但若需長(zhǎng)期保存或避免反復(fù)取用，可考慮分裝后保存于-20°C或-80°C。注意避免反復(fù)凍融，以免降低抗體活性。

3. 陽(yáng)性對(duì)照建議：建議使用高表達(dá)BRD9的細(xì)胞系（如HeLa、HEK293、HCT116等）裂解液作為WB陽(yáng)性對(duì)照。同時(shí)設(shè)置無(wú)抗體對(duì)照或同型對(duì)照用于IP實(shí)驗(yàn)，以排除非特異性結(jié)合。

4. 應(yīng)用驗(yàn)證范圍：本產(chǎn)品已在IP和WB應(yīng)用中得到驗(yàn)證，但不保證在其他應(yīng)用（如免疫熒光、免疫組化、ChIP等）中的效果。如需拓展應(yīng)用（如ChIP-seq檢測(cè)BRD9在染色質(zhì)上的結(jié)合位點(diǎn)），建議自行進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化條件。

5. 實(shí)驗(yàn)參數(shù)優(yōu)化：推薦的WB稀釋范圍和IP用量為起始參考值。對(duì)于特定的樣本類型（如組織裂解液或核提取物），可能需要進(jìn)一步優(yōu)化抗體濃度、封閉條件和孵育時(shí)間。