產(chǎn)品概述

本產(chǎn)品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的用于定量檢測大鼠血清、血漿及尿液中白蛋白（Albumin）濃度的夾心法ELISA試劑盒（貨號：E111-125）。試劑盒采用預(yù)包被96孔板、生物素化檢測抗體及鏈霉親和素-HRP（SA-HRP）顯色系統(tǒng)，檢測范圍為1.37 – 1000 ng/ml，適用于大鼠白蛋白的精確定量分析。該試劑盒在大鼠生理學(xué)、藥代動力學(xué)、腎功能評估及相關(guān)疾病模型研究中具有廣泛應(yīng)用價值。

核心參數(shù)

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶標(biāo) 大鼠白蛋白（Rat Albumin）

反應(yīng)種屬 大鼠

應(yīng)用 ELISA

檢測范圍 1.37 – 1000 ng/ml

樣本類型 血清、血漿、尿液

檢測方法 生物素化-鏈霉親和素-HRP

檢測類型 夾心法ELISA

保存條件 2 - 8 °C

有效期 收貨后6個月

試劑盒組分

組分 規(guī)格 數(shù)量

大鼠白蛋白預(yù)包被96孔板 96孔/板 1塊

大鼠白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 1000 ng/瓶 2瓶

大鼠白蛋白檢測抗體 12 ml 1瓶

20X 稀釋緩沖液C 25 ml 1瓶

HRP溶液A 12 ml 1瓶

TMB底物液 12 ml 1瓶

終止液 12 ml 1瓶

20X 洗滌緩沖液 50 ml 1瓶

封板膜 — 6張

檢測原理

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（Sandwich ELISA）：

1. 包被：96孔板已預(yù)包被抗大鼠白蛋白捕獲抗體。

2. 加樣：將標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本加入孔中，樣本中的白蛋白與捕獲抗體結(jié)合。

3. 檢測：加入生物素化的大鼠白蛋白檢測抗體，形成“捕獲抗體-白蛋白-檢測抗體"夾心復(fù)合物。

4. 酶聯(lián)：加入鏈霉親和素標(biāo)記的辣根過氧化物酶（HRP Solution A），與檢測抗體上的生物素特異性結(jié)合。

5. 顯色：加入TMB底物液，HRP催化底物產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物；加入終止液后顏色變?yōu)辄S色。

6. 讀數(shù)：在450 nm波長處測定吸光度（OD值）。樣本中的白蛋白濃度與OD值呈正比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出。

操作流程要點

樣本準(zhǔn)備

血清/血漿：按常規(guī)方法采集，避免溶血。建議適當(dāng)稀釋后檢測（具體稀釋倍數(shù)需預(yù)實驗確定）。

尿液：可適當(dāng)稀釋后直接檢測。

使用20X稀釋緩沖液C配制1X工作液，用于標(biāo)準(zhǔn)品和樣本的稀釋。

洗滌液配制

將50 ml 20X洗滌緩沖液用去離子水或蒸餾水稀釋至1000 ml（即1:20稀釋），混勻備用。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

標(biāo)準(zhǔn)品每瓶含1000 ng大鼠白蛋白。加入適量稀釋緩沖液復(fù)溶，制備最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品（1000 ng/ml）。

進(jìn)行倍比稀釋，至少制備6-8個標(biāo)準(zhǔn)點（如1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.90625、1.953125、1.37 ng/ml）。建議設(shè)置零孔（稀釋緩沖液空白）作為背景對照。

檢測步驟（簡述）

1. 將標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋后的樣本加入預(yù)包被板孔中，每孔100 µl，覆蓋封板膜，孵育（按試劑盒說明書推薦時間和溫度，通常室溫或37°C孵育1-2小時）。

2. 棄去孔內(nèi)液體，每孔加入300 µl 1X洗滌液，洗板3-5次。

3. 加入檢測抗體，每孔100 µl，孵育（通常30-60分鐘）。

4. 洗板3-5次。

5. 加入HRP溶液A，每孔100 µl，孵育（通常30分鐘）。

6. 洗板3-5次。

7. 加入TMB底物液，每孔100 µl，避光孵育（通常10-20分鐘），直至標(biāo)準(zhǔn)品孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色梯度。

8. 加入終止液，每孔100 µl，輕拍混勻。

9. 在450 nm波長處讀取OD值（建議30分鐘內(nèi)完成）。

白蛋白是血清中豐富的蛋白質(zhì)，具有多項重要生理功能：

滲透壓調(diào)節(jié)：通過與水分子結(jié)合，維持血漿膠體滲透壓，調(diào)節(jié)血管內(nèi)外水平衡。

物質(zhì)運輸：結(jié)合并運輸脂肪酸、氨基酸、激素、膽紅素、藥物等多種疏水性或內(nèi)源性化合物。

pH緩沖：作為兩性電解質(zhì)，參與血液pH的穩(wěn)定。

在疾病狀態(tài)下，白蛋白水平的變化具有臨床指示意義：

腎損傷：尿白蛋白排泄增加（微量白蛋白尿）是腎小球濾過屏障受損的早期標(biāo)志，用于糖尿病腎病、高血壓腎損害等疾病的早期診斷。

肝功能不全：血清白蛋白降低提示肝臟合成功能障礙，常見于肝硬化、肝炎等。

營養(yǎng)不良/消耗性疾?。喊椎鞍卓勺鳛闋I養(yǎng)狀態(tài)的評估指標(biāo)。

本試劑盒檢測范圍覆蓋1.37 – 1000 ng/ml，尤其適用于微量白蛋白尿的檢測（通常定義：尿白蛋白排泄率30-300 mg/24h或尿白蛋白/肌酐比值30-300 µg/mg）。對于高濃度樣本（如血清），需進(jìn)行適當(dāng)稀釋以落入標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

使用注意事項

1. 樣本稀釋：大鼠血清中白蛋白濃度j高（約30-50 mg/ml），直接檢測遠(yuǎn)超試劑盒檢測上限（1000 ng/ml）。建議先進(jìn)行預(yù)實驗確定最佳稀釋倍數(shù)（通常需稀釋1:50,000至1:200,000倍）。尿液樣本根據(jù)實驗?zāi)康目赡苄柘♂尰虿幌♂專z測微量白蛋白尿時可選用低稀釋倍數(shù)）。

2. 避免交叉污染：使用一次性吸頭，標(biāo)準(zhǔn)品和樣本按順序加樣。洗板時確保每次洗滌液加滿孔并充分吸干，不可出現(xiàn)干孔現(xiàn)象。

3. 顯色控制：TMB顯色時間需根據(jù)室溫及酶活性適當(dāng)調(diào)整。當(dāng)最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品孔顯色達(dá)到深藍(lán)色、背景空對照孔無明顯藍(lán)色時，應(yīng)及時終止。

4. 檢測波長：終止后的反應(yīng)產(chǎn)物在450 nm處讀取OD值。若使用雙波長校正（450 nm減去570 nm或630 nm背景波長），可減少因板底瑕疵引起的誤差。

5. 有效期：試劑盒自收貨之日起2-8°C保存，有效期6個月。不同批次試劑組分不可混用。

6. 避免反復(fù)凍融：標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后建議按單次使用量分裝保存于-20°C或-80°C，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白降解。