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產(chǎn)品概述
本產(chǎn)品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人源ELL2蛋白(RNA polymerase II elongation factor ELL2)的兔多克隆抗體,貨號A302-505A。抗體以未標記的完整IgG形式提供,適用于免疫沉淀(IP)和蛋白質印跡(WB)應用。該抗體經(jīng)抗原親和純化,特異性識別ELL2蛋白中部區(qū)域(第400-450位氨基酸殘基之間的表位),可用于檢測人源細胞中ELL2的表達水平、轉錄延伸復合物分析及相關蛋白互作研究。
核心參數(shù)
參數(shù) 詳細信息
靶標 ELL2
反應種屬 人
宿主 兔
克隆性 多克隆
形式 完整IgG
免疫原區(qū)域 第400-450位氨基酸(參考序列NP_036213.2)
同型 IgG
偶聯(lián)物 未偶聯(lián)
純度 抗原親和純化
濃度 1000 µg/ml
保存條件 2 - 8 °C
有效期 收貨后1年
緩沖液 Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液,pH 7-8,含0.09%疊d化鈉
制備與純化
本抗體采用固相固定化技術,使用特異性針對ELL2蛋白的表位進行親和純化。具體而言,識別表位定位于人源RNA聚合酶II延伸因子ELL2的第400至450位氨基酸區(qū)域(基于GeneID 22936,序列編號NP_036213.2)。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定,設定1 mg/mL IgG在A280波長的吸光度為1.4。
應用與推薦稀釋度
蛋白質印跡(Western Blot, WB)
推薦稀釋度:1:2000 - 1:10,000
操作規(guī)范:
所有WB實驗均使用5% Milk-TBST作為封閉液和抗體稀釋液
一抗孵育條件:過夜孵育
細胞裂解液的WB檢測:使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體(貨號A120-101P)
免疫沉淀物的WB檢測:使用HRP標記的抗兔IgG輕鏈抗體,并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清(貨號S100-020)
免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)
推薦用量:6 µg抗體 / mg裂解液蛋白
產(chǎn)品特性說明
特異性與靈敏度
本抗體經(jīng)親和純化,特異識別ELL2蛋白。ELL2是延伸因子ELL家族成員,通過抑制RNA聚合酶II在DNA多位點的瞬時暫停,提高轉錄延伸速率。由于為多克隆抗體,可識別目標抗原上的多個表位,具有較高的檢測靈敏度,適用于低豐度蛋白的檢測。
工作濃度優(yōu)勢
WB推薦稀釋范圍寬(1:2000-1:10,000),便于用戶根據(jù)樣本表達量和檢測體系進行靈活優(yōu)化。IP推薦用量明確(6 µg/mg裂解液),降低了預實驗摸索的工作量。
儲存穩(wěn)定性
在2-8°C條件下可穩(wěn)定保存1年(自收貨之日起)。緩沖液中含0.09%疊d化鈉作為防腐劑,注意疊氮化物會抑制過氧化物酶活性,若計劃進行HRP偶聯(lián)二抗檢測,需在實驗前通過透析或脫鹽柱去除。
別名: ELL-related RNA polymerase II elongation factor; elongation factor RNA for polymerase II 2; elongation factor, RNA polymerase II, 2; metastatic renal cell carcinoma-associated transcript 1 (MRCCAT1)
使用注意事項
1. 疊氮化物干擾:緩沖液中含有0.09%疊d化鈉。若下游實驗使用HRP偶聯(lián)二抗進行檢測,需注意疊氮化物會抑制HRP活性。建議在進行WB或ELISA檢測前,通過PBS透析或使用脫鹽柱去除疊氮化物。
2. 抗體分裝:雖然產(chǎn)品在2-8°C條件下穩(wěn)定,但若需長期保存或避免反復取用,可考慮分裝后保存于-20°C或-80°C。注意避免反復凍融,以免降低抗體活性。
3. 陽性對照建議:建議使用高表達ELL2的細胞系(如HeLa、HEK293、K562等)裂解液作為WB陽性對照。同時設置無抗體對照或同型對照用于IP實驗,以排除非特異性結合。
4. 應用驗證范圍:本產(chǎn)品已在IP和WB應用中得到驗證,但不保證在其他應用(如免疫熒光、免疫組化、ChIP等)中的效果。如需拓展應用,建議自行進行預實驗優(yōu)化條件。
5. 實驗參數(shù)優(yōu)化:推薦的WB稀釋范圍和IP用量為起始參考值。對于特定的樣本類型(如組織裂解液或核提取物),可能需要進一步優(yōu)化抗體濃度、封閉條件和孵育時間。
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