產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的XRN2抗體（貨號A301-103A）是一款針對人源5′→3′核酸外切酶2（XRN2）的兔多克隆抗體，經(jīng)抗原親和純化，以未偶聯(lián)完整IgG形式提供。該抗體可識別小鼠及人類樣本中的XRN2蛋白，適用于免疫印跡、免疫沉淀及免疫組織化學檢測，為RNA代謝及轉錄終止調控研究提供可靠工具。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) 詳細信息

靶標 XRN2（5′-3′ exoribonuclease 2）

反應性 小鼠、人類

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第900位氨基酸至C端區(qū)域

抗體形式 完整IgG

同型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人類

濃度 200 µg/ml

緩沖液 Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉

儲存條件 2–8 °C

保質期 到貨后1年

免疫原與特異性驗證

A301-103A抗體采用固相載體上固定的XRN2特異性表位進行親和純化。該抗體識別的表位位于人XRN2蛋白的第900至950位氨基酸之間（參考編號NP_036387.2，GeneID 22803）。免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測定：1 mg/mL IgG在A280波長處的吸光度為1.4。

特異性驗證要點：

經(jīng)抗原親和純化，顯著降低非特異性交叉反應

免疫原區(qū)域位于蛋白C端（900–950 aa），該區(qū)域在不同物種間保守性較高，支持小鼠與人樣本的交叉檢測

建議通過預吸附實驗或使用敲除裂解物作為陰性對照，進一步驗證特異性

應用方法與推薦工作濃度

免疫印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:5,000 – 1:25,000

實驗方案要點：

封閉液及抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST

一抗孵育條件：4°C孵育過夜（建議）

細胞裂解液檢測：使用山羊抗兔IgG重鏈+輕鏈抗體（貨號A120-101P）作為二抗

免疫沉淀物檢測：使用兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景

> 功能性提示：寬稀釋范圍（1:5000–1:25000）允許用戶根據(jù)目標蛋白豐度靈活優(yōu)化信噪比。對于高表達樣本，可使用1:25000稀釋以節(jié)省抗體；對于低表達或免疫沉淀后的檢測，建議從1:5000開始梯度測試。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細胞裂解物

操作注意事項：

裂解緩沖液中建議添加蛋白酶抑制劑，防止XRN2降解

抗體與裂解物共孵育時間：4°C旋轉孵育2小時至過夜

使用Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠捕獲免疫復合物

洗脫后建議用輕鏈特異性二抗進行WB檢測，避免重鏈信號（約55 kDa）干擾XRN2目標條帶（預期分子量約120 kDa）

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋范圍：1:500 – 1:2000

抗原修復條件：

對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復

可對比嘗試pH 9.0 Tris-EDTA緩沖液，但根據(jù)產(chǎn)品信息，pH 6.0為更優(yōu)選擇

靶點生物學背景：XRN2

XRN2（5′-3′ exoribonuclease 2）是一種進化保守的5′→3′方向核酸外切酶，在RNA代謝中發(fā)揮關鍵作用。

核心功能：

轉錄終止：XRN2參與RNA聚合酶II介導的轉錄終止過程。當poly(A)信號被識別并完成3′端切割后，XRN2降解下游切割產(chǎn)生的RNA片段，觸發(fā)轉錄終止。

mRNA 3′端加工：負責降解3′端切割后下游的RNA產(chǎn)物，確保成熟的mRNA 3′端形成。

質量控制：參與異常RNA的降解清除。

儲存與穩(wěn)定性指南

儲存溫度：2–8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致抗體聚集或活性下降。

防腐劑：0.09%疊d化鈉，可抑制微生物生長。注意疊d化鈉對某些細胞實驗可能有毒性，如需去除，可通過透析或脫鹽柱處理。

穩(wěn)定劑：0.1% BSA，降低非特異性吸附及管壁損耗。

有效期：自到貨之日起1年。建議分裝成單次使用量儲存于2–8°C，避免反復開管。

應用場景推薦

1. 轉錄終止機制研究：結合RNA聚合酶II ChIP或run-on實驗，利用XRN2抗體檢測其在基因3′端的富集變化。

2. RNA加工復合物互作分析：通過免疫沉淀結合質譜鑒定XRN2的相互作用蛋白（如p54nrb/PSF）。

3. 組織表達譜定位：利用IHC檢測XRN2在正常組織與病理組織（如腫瘤）中的定位及表達差異。

4. 基因敲低表型驗證：以WB方式驗證siRNA或CRISPR介導的XRN2沉默效率。

總結：A301-103A抗體是一款經(jīng)過親和純化、驗證了多種應用的多克隆抗體，覆蓋小鼠及人源XRN2檢測。其寬稀釋范圍（WB 1:5000–1:25000）、明確免疫原定位（900–950 aa）及優(yōu)化的IHC修復條件（pH 6.0檸檬酸鹽），為RNA代謝研究提供了高性價比的免疫檢測工具。遵循上述實驗參數(shù)及問題排查建議，可有效提高實驗成功率和數(shù)據(jù)可重復性。