產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的CDC20抗體（貨號A301-180A）是一款針對人源細胞分裂周期蛋白20（CDC20）的兔多克隆抗體，經(jīng)抗原親和純化，以未偶聯(lián)完整IgG形式提供。該抗體可識別小鼠及人類樣本中的CDC20蛋白，適用于免疫印跡、免疫沉淀及免疫組織化學檢測，為細胞周期調(diào)控及紡錘體組裝檢查點研究提供高靈敏度的檢測工具。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) 詳細信息

靶標 CDC20（細胞分裂周期蛋白20）

反應性 小鼠、人類

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第449位氨基酸至C端區(qū)域

抗體形式 完整IgG

同型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人類

濃度 1000 µg/ml（1 mg/ml）

緩沖液 Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

儲存條件 2–8 °C

保質(zhì)期 到貨后1年

突出優(yōu)勢：該抗體濃度為1000 µg/ml，顯著高于常規(guī)抗體（通常200 µg/ml），意味著每微升可提供更多活性抗體，適合大規(guī)模或高靈敏度實驗。

免疫原與特異性驗證

A301-180A抗體采用固相載體上固定的CDC20特異性表位進行親和純化。該抗體識別的表位位于人CDC20蛋白的第449至499位氨基酸之間（參考編號NP_001246.2，GeneID 991）。免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測定：1 mg/mL IgG在A280波長處的吸光度為1.4。

特異性驗證要點：

免疫原區(qū)域位于蛋白C端（449–499 aa），該區(qū)域在CDC20同源物中保守性較高，支持小鼠與人樣本的交叉檢測

經(jīng)抗原親和純化，顯著降低非特異性交叉反應

建議使用CDC20敲低或過表達裂解物作為WB陽性/陰性對照

應用方法與推薦工作濃度

免疫印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:2,000 – 1:10,000

實驗方案要點：

封閉液及抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST

一抗孵育條件：4°C孵育過夜（推薦）

細胞裂解液檢測：使用山羊抗兔IgG重鏈+輕鏈抗體（貨號A120-101P）作為二抗

免疫沉淀物檢測：使用兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景

> 功能性提示：由于抗體濃度高達1000 µg/ml，即使稀釋到1:10,000仍可獲得足夠的工作濃度（0.1 µg/ml）。對于高表達樣本（如增殖活躍的細胞系），可嘗試更高稀釋倍數(shù)以節(jié)省抗體。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細胞裂解物

操作注意事項：

裂解緩沖液中建議添加蛋白酶抑制劑（如PMSF、蛋白酶抑制劑混合物）

抗體與裂解物共孵育：4°C旋轉(zhuǎn)孵育2小時至過夜

使用Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠捕獲免疫復合物

洗脫后建議使用輕鏈特異性二抗進行WB檢測，避免重鏈信號（約55 kDa）干擾CDC20目標條帶（預期分子量約55–60 kDa，與重鏈位置相近）

> 關鍵提示：CDC20的分子量約為55–60 kDa，與IgG重鏈（約55 kDa）幾乎w全重疊。因此，在IP-WB實驗中必須使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗（如貨號S100-020配套的二抗），否則重鏈信號會嚴重掩蓋CDC20條帶。

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋范圍：1:500 – 1:2,000

抗原修復條件：

對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復

可嘗試EDTA緩沖液（pH 8.0–9.0），但根據(jù)產(chǎn)品信息，pH 6.0檸檬酸鹽為推薦方案

染色步驟建議：

1. 脫蠟、水合后，用3% H?O?封閉內(nèi)源過氧化物酶

2. 微波或高壓鍋加熱至沸騰，維持10–20分鐘進行抗原修復

3. 室溫冷卻20–30分鐘，正常血清封閉30分鐘

4. 一抗4°C孵育過夜或室溫2小時

5. HRP標記二抗及DAB顯色，蘇木精復染

組織類型參考：CDC20在增殖活躍的組織（如睪丸、骨髓、腫瘤組織）中表達較高，在靜止期組織中表達較低。

儲存與穩(wěn)定性指南

儲存溫度：2–8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致蛋白聚集及活性下降。

防腐劑：0.09%疊d化鈉，可抑制微生物生長。若用于活細胞實驗，需透析去除。

緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，提供穩(wěn)定的pH環(huán)境。

有效期：自到貨之日起1年。建議在瓶身標注收到日期，避免超期使用。

應用場景推薦

1. 細胞周期同步化實驗：通過WB檢測CDC20在細胞周期不同時相的表達變化，驗證藥物或基因干預的效果。

2. APC/C活性調(diào)控機制：使用免疫沉淀結合體外泛素化實驗，研究CDC20突變體對APC/C活性的影響。

3. 腫瘤標志物檢測：利用IHC或WB檢測臨床樣本中CDC20的表達水平，評估其與腫瘤惡性程度及預后的相關性。

4. 紡錘體組裝檢查點功能解析：通過IP檢測CDC20與Mad2、BubR1等SAC蛋白的相互作用，闡明檢查點信號傳導機制。

質(zhì)量控制與批次一致性

每批次A301-180A抗體均經(jīng)過以下質(zhì)控檢測：

WB驗證：檢測HeLa細胞裂解液，確認在55–60 kDa處出現(xiàn)特異性條帶

IP驗證：從HeLa裂解物中免疫沉淀CDC20，并通過WB確認捕獲效率

濃度測定：A280吸光度精確定量，確保批間濃度為1000 µg/ml ± 10%

無菌及內(nèi)毒素檢測：根據(jù)客戶要求可提供數(shù)據(jù)報告