一、產(chǎn)品概述

本產(chǎn)品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款針對(duì)人TFEB蛋白的高親和力兔多克隆抗體（貨號(hào) A303-673A），經(jīng)抗原親和純化制備。該抗體適用于免疫沉淀（IP）及蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測(cè)，可同時(shí)識(shí)別人和小鼠來(lái)源的靶蛋白，僅供研究使用。

TFEB（Transcription factor EB）是MiT/TFE家族成員之一，屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋亮氨酸拉鏈（bHLH-Zip）轉(zhuǎn)錄因子。TFEB能夠特異性識(shí)別E-box序列（3′-CANNTG-5′），與自身或家族其他成員（如TFE3、MITF）形成二聚體后高效結(jié)合DNA。TFEB在細(xì)胞中發(fā)揮雙重核心功能：一方面與TFE3協(xié)同激活T細(xì)胞中CD40L的表達(dá)，參與CD4+ T細(xì)胞依賴(lài)的抗體應(yīng)答及胸腺依賴(lài)性體液免疫；另一方面，TFEB通過(guò)識(shí)別溶酶體相關(guān)基因調(diào)控區(qū)的CLEAR-box序列（5′-GTCACGTGAC-3′），激活溶酶體基因的表達(dá)，是溶酶體生物發(fā)生和自噬通路的關(guān)鍵調(diào)控因子。此外，TFEB還可識(shí)別免疫球蛋白重鏈增強(qiáng)子中的γ-E3 box。近年來(lái)，TFEB已成為溶酶體穩(wěn)態(tài)、自噬、代謝疾病及神經(jīng)退行性疾病研究的熱點(diǎn)靶點(diǎn)。

二、產(chǎn)品規(guī)格

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶標(biāo) TFEB

反應(yīng)種屬 小鼠， 人

應(yīng)用 IP， WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原 位于第426位至C末端之間

同種型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人

濃度 1000 µg/mL（1 mg/mL）

緩沖液 Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

儲(chǔ)存條件 2–8°C

有效期 自收貨之日起1年

三、靶標(biāo)詳細(xì)信息

3.1 別名

ALPHATFEB， BHLHE35， class E basic helix-loop-helix protein 35， T-cell transcription factor EB， TCFEB。

3.2 功能背景

TFEB是調(diào)控細(xì)胞清除通路的核心轉(zhuǎn)錄因子，其功能涵蓋以下方面：

溶酶體生物發(fā)生：TFEB識(shí)別CLEAR-box（協(xié)同溶酶體表達(dá)與調(diào)控元件），激活超過(guò)200個(gè)溶酶體相關(guān)基因的表達(dá)，包括組織蛋白酶、溶酶體膜蛋白等。

自噬調(diào)控：TFEB誘導(dǎo)自噬體形成及自噬溶酶體融合所需的基因（如LC3、p62、ATG家族），是細(xì)胞應(yīng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)匱乏和應(yīng)激的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。

免疫調(diào)節(jié)：在活化的CD4+ T細(xì)胞中，TFEB與TFE3共同激活CD40L轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)B細(xì)胞類(lèi)別轉(zhuǎn)換和生發(fā)中心形成，介導(dǎo)胸腺依賴(lài)性體液免疫應(yīng)答。

代謝與疾?。篢FEB活性受mTORC1磷酸化調(diào)控（位于Ser142/Ser211位點(diǎn)）。在溶酶體貯積癥、帕金森病、阿爾茨海默病及非酒精性脂肪肝中，TFEB的核轉(zhuǎn)位和轉(zhuǎn)錄活性異常，成為潛在治療靶點(diǎn)。

四、抗體制備與純化

4.1 免疫原及表位定位

本抗體采用的免疫原對(duì)應(yīng)人TFEB蛋白序列中第426位至C末端之間的區(qū)域。經(jīng)精確定位，A303-673A所識(shí)別的表位位于第426–476氨基酸區(qū)間（參考序列NP_009093.1）。該區(qū)域位于C端轉(zhuǎn)錄激活域（TAD）內(nèi)，遠(yuǎn)離bHLH二聚化和DNA結(jié)合域，因此抗體不太可能干擾TFEB與DNA或二聚化伴侶的結(jié)合，適合IP及后續(xù)功能研究。

4.2 純化方法

抗體通過(guò)抗原親和層析純化。將針對(duì)TFEB C端表位（第426–476位）的特異性多肽固定于固相載體，使抗血清中的特異性IgG結(jié)合于該表位，經(jīng)洗脫獲得高純度抗體。此法確保最終產(chǎn)品中只保留識(shí)別目標(biāo)表位的抗體分子，顯著降低非特異性背景，尤其適合IP-WB聯(lián)用實(shí)驗(yàn)。

4.3 濃度測(cè)定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定，以1 mg/mL IgG在280 nm下的吸光度（A280）為1.4作為標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)測(cè)濃度為1000 µg/mL（1 mg/mL）。

4.4 緩沖液與防腐劑

抗體儲(chǔ)存于Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液（pH 7–8），含0.09%疊d化鈉作為防腐劑。注意：疊d化鈉有毒，操作時(shí)請(qǐng)佩戴防護(hù)手套。若用于細(xì)胞培養(yǎng)或體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，使用前應(yīng)通過(guò)透析或超濾去除。

五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

收到產(chǎn)品后，請(qǐng)將抗體置于2–8°C條件下儲(chǔ)存。切勿冷凍，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性聚集、效價(jià)下降。在推薦的儲(chǔ)存條件下，自收貨之日起1年內(nèi)可保持穩(wěn)定。若需長(zhǎng)期保存，可分裝后凍存于-20°C或-80°C，分裝時(shí)避免稀釋?zhuān)糠萁ㄗh一次用完，避免反復(fù)凍融。

六、產(chǎn)品特點(diǎn)總結(jié)

1. 雙種屬反應(yīng)性：同時(shí)識(shí)別人和小鼠TFEB，適用于跨物種研究。

2. C端表位精確定位：抗原親和純化基于第426–476位氨基酸，位于轉(zhuǎn)錄激活域，不影響二聚化及DNA結(jié)合，適合IP及蛋白互作研究。

3. 高濃度（1 mg/mL）與寬稀釋范圍：WB稀釋比1:2000–1:25,000，6 µg/mg裂解液即可高效IP，節(jié)約抗體用量。

4. 低背景IP-WB優(yōu)化：推薦使用輕鏈HRP二抗+5%正常豬血清體系，消除免疫球蛋白重/輕鏈對(duì)目標(biāo)條帶的干擾（TFEB約55-65 kDa，輕鏈25 kDa和重鏈55 kDa可能干擾）。尤其重鏈55 kDa與TFEB接近，必須使用輕鏈特異性二抗。

5. 長(zhǎng)期穩(wěn)定性：2–8°C儲(chǔ)存1年有效，簡(jiǎn)化冷鏈管理。

注意：本產(chǎn)品僅限研究使用，不得用于診斷或治療。用戶(hù)應(yīng)自行驗(yàn)證抗體在其特定實(shí)驗(yàn)體系中的適用性。以上信息覆蓋了A303-673A抗體的全部規(guī)格、應(yīng)用參數(shù)及背景知識(shí)，使用者可據(jù)此快速建立TFEB的WB和IP檢測(cè)方案，獲得可靠且可重復(fù)的結(jié)果。