產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源重組單克隆抗體（貨號：A700-004），特異性靶向人源BRD4蛋白（含溴結(jié)構(gòu)域蛋白4）。克隆號BL-149-2H5，經(jīng)細胞培養(yǎng)上清純化，以完整IgG形式提供，適用于染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）、流式細胞術(shù)（Flow Cyt）、免疫細胞化學(xué)（ICC）、免疫熒光（ICC-IF）、免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB）實驗，可識別小鼠及人類樣本中的BRD4蛋白。本品濃度為100 µg/ml，為轉(zhuǎn)錄調(diào)控和表觀遺傳學(xué)研究提供了高特異性、高批次一致性的檢測工具。

靶點背景：BRD4的染色質(zhì)適配子功能與轉(zhuǎn)錄調(diào)控

BRD4（Bromodomain-containing protein 4）是含溴結(jié)構(gòu)域蛋白家族的成員之一，作為染色質(zhì)適配子和轉(zhuǎn)錄共因子，在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮核心作用。

結(jié)構(gòu)與功能特征：

含有兩個溴結(jié)構(gòu)域（bromo-domains），可特異性識別并結(jié)合組蛋白上乙酰化的賴氨酸殘基

最初被鑒定為MCAP（mitotic chromosome associated protein），在有絲分裂染色體上持續(xù)結(jié)合

與多個轉(zhuǎn)錄復(fù)合物相互作用，包括Mediator復(fù)合物和P-TEFb復(fù)合物

通過募集P-TEFb（正向轉(zhuǎn)錄延伸因子b）促進RNA聚合酶II的轉(zhuǎn)錄延伸

生物學(xué)功能：

結(jié)合乙酰化染色質(zhì)，作為表觀遺傳信號的解讀器

調(diào)控多種基因的轉(zhuǎn)錄延伸，尤其參與細胞周期、炎癥和致癌基因的表達

在多種癌癥（如急性髓系白血病、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤）中異?；罨?，已成為重要的抗腫瘤藥物靶點（如BET抑制劑）

別名： CAP、HUNK1、HUNKI、MCAP、chromosome-associated protein、Protein HUNK1

抗體特性規(guī)格

參數(shù) 規(guī)格

靶點 BRD4

宿主 兔

克隆性 重組單克隆

克隆號 BL-149-2H5

形式 完整IgG

同種型 IgG

偶聯(lián)物 非偶聯(lián)

純度 純化（細胞培養(yǎng)上清）

濃度 100 µg/ml

抗原物種 人

反應(yīng)性 小鼠、人

免疫原信息：

抗體識別的表位位于人BRD4蛋白C末端區(qū)域。具體對應(yīng)NCBI條目NP_490597.1編號中的第1312-1362位氨基酸（GeneID 23476）。該C末端表位的選擇有助于識別全長BRD4蛋白，并可能避免與BRD2、BRD3等其他含溴結(jié)構(gòu)域蛋白的交叉反應(yīng)。

儲存與穩(wěn)定性

儲存溫度：2-8°C（請勿冷凍）

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液：磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.1% BSA及0.09%疊氮鈉

> 注意：疊氮鈉作為防腐劑，如需進行細胞培養(yǎng)或體內(nèi)注射實驗，應(yīng)通過透析或超濾去除。本品為重組單克隆抗體，批次間一致性高，可長期穩(wěn)定保存。

應(yīng)用方法與實驗條件

蛋白質(zhì)印跡（WB）

推薦稀釋度：1:1000

通用流程要點：

封閉液及抗體稀釋液：5% Milk-TBST

一抗孵育：過夜（4°C）

二抗選擇：

細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀物WB：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020），以避免IgG重鏈信號干擾

預(yù)期條帶：BRD4有多個亞型，主要亞型分子量約為150 kDa（長亞型）和約80 kDa（短亞型，缺乏C末端）。

免疫沉淀（IP）

使用劑量：20 µl抗體/mg細胞裂解液

操作說明：按每毫克細胞裂解液加入20 µl本品（含2 µg抗體，因濃度100 µg/ml，20 µl含2 µg）。該用量相對常規(guī)IP抗體（6 µg/mg）略低，但經(jīng)重組單克隆優(yōu)化，仍可高效捕獲目標(biāo)蛋白。

免疫組織化學(xué)（IHC）

推薦稀釋度：1:100 - 1:500

抗原修復(fù)：對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)。

免疫細胞化學(xué)（ICC）

推薦稀釋度：1:100 - 1:500

FFPE細胞切片處理：建議使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進行抗原修復(fù)。

免疫細胞化學(xué)/免疫熒光（ICC-IF）

推薦稀釋度：1:25 - 1:250

固定與透化建議：

固定：推薦使用甲醛（4%）固定

透化：對于甲醛固定的細胞，推薦使用Triton X-100進行透化處理

流式細胞術(shù)（Flow Cyt）

使用劑量：1 µl/1×10?個細胞

固定與透化流程：

固定：4%甲醛

透化：90%甲醇

注意：甲醇透化條件與常規(guī)Triton X-100不同，請嚴(yán)格按照上述條件操作以確保抗原可及性。

染色質(zhì)免疫沉淀測序（ChIP-Seq）

使用劑量：10-40 µl/30 µg染色質(zhì)

批次說明：此前批次已通過ChIP-Seq驗證合格。由于本品為重組單克隆抗體，批次間一致性高，后續(xù)批次預(yù)期性能穩(wěn)定。

操作建議：

使用10-40 µl抗體與30 µg片段化染色質(zhì)孵育（建議從20 µl開始優(yōu)化）

參考標(biāo)準(zhǔn)ChIP-Seq流程進行洗滌、洗脫和DNA純化

相關(guān)產(chǎn)品推薦

山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）——用于細胞裂解液WB檢測

抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體——用于免疫沉淀物WB檢測，有效避免重鏈干擾

正常豬血清（S100-020）——用于IP-WB封閉液添加（5%），降低非特異性背景

熒光標(biāo)記抗兔二抗——用于ICC-IF和流式細胞術(shù)檢測（如Alexa Fluor 488/555/647偶聯(lián)物）

蛋白A/G磁珠——用于ChIP和IP實驗中的抗體捕獲

本品為重組單克隆抗體，以高特異性、高批次一致性和7種應(yīng)用平臺兼容性為核心優(yōu)勢，尤其適合需要跨技術(shù)路線驗證BRD4功能的研究項目。建議使用者針對各應(yīng)用按照推薦的起始條件進行預(yù)實驗優(yōu)化，并注意區(qū)分BRD4長/短亞型的表達特征。對于ChIP-Seq和流式等對抗體性能要求較高的應(yīng)用，可直接參考此前已發(fā)表的批次驗證數(shù)據(jù)。