本抗體為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗體（貨號(hào)：A300-855A），特異性識(shí)別DHX9（DEAH盒解旋酶9）蛋白的C末端區(qū)域（第1220位至C末端）。經(jīng)抗原親和純化，提供完整IgG分子形式，未偶聯(lián)任何標(biāo)記物（Unconjugated），濃度為200 µg/mL。適用于免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質(zhì)印跡（WB），反應(yīng)種屬為人。

產(chǎn)品規(guī)格與理化參數(shù)

參數(shù)項(xiàng)目 詳細(xì)規(guī)格

目標(biāo)抗原 DHX9（DEAH盒解旋酶9，又稱(chēng)RNA解旋酶A）

反應(yīng)種屬 人

宿主來(lái)源 兔

克隆類(lèi)型 多克隆

抗體形式 完整IgG

免疫原 第1220位至C末端（第1270位）之間的區(qū)域

亞型 IgG

偶聯(lián)物 無(wú)

純度 抗原親和純化

抗原物種 人

濃度 200 µg/mL

保存條件 2–8 °C

有效期限 自收貨起1年

緩沖體系 Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA和0.09%疊d化鈉

濃度測(cè)定依據(jù)：采用比爾定律（Beer’s Law），標(biāo)準(zhǔn)為1 mg/mL IgG在280 nm波長(zhǎng)處的吸光值（A280）為1.4。

抗原背景：DHX9/RNA解旋酶A的結(jié)構(gòu)與功能

DHX9（DExH-box helicase 9），又稱(chēng)RNA解旋酶A（RHA）、核DNA解旋酶II（NDH II），是DEAH盒蛋白家族成員之一。該家族蛋白含有一個(gè)高度保守的DEAH（Asp-Glu-Ala-His）氨基酸序列基序，主要功能為ATP依賴(lài)的RNA解旋酶。

核心功能：

RNA代謝的多面手：參與前體mRNA剪接、RNA合成、RNA降解、RNA輸出、RNA翻譯、RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)形成、核糖體生物發(fā)生及RNP復(fù)合物組裝

轉(zhuǎn)錄共激活：作為CREB結(jié)合蛋白（CBP）和RNA聚合酶II之間的橋梁，共激活CBP依賴(lài)性轉(zhuǎn)錄；與BRCA1相互作用，參與DNA損傷應(yīng)答

逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA核輸出：促進(jìn)逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA的核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)

RNA編輯與snRNP組裝：參與RNA編輯和小核核糖核蛋白顆粒的組裝

結(jié)構(gòu)特征：

N端：含有兩個(gè)dsRNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（dsRBD），識(shí)別雙鏈RNA

中央：DEAH解旋酶核心結(jié)構(gòu)域，包含ATP酶活性和RNA解旋活性

C端：含有核定位信號(hào)（NLS）和蛋白-蛋白相互作用區(qū)域（本抗體識(shí)別區(qū)域，1220–1270位）

本抗體的靶向優(yōu)勢(shì)：識(shí)別C末端區(qū)域（1220–1270），可檢測(cè)內(nèi)源性全長(zhǎng)DHX9（分子量約140–150 kDa），且不影響抗體與解旋酶結(jié)構(gòu)域的結(jié)合，適用于IP-MS、ChIP等下游功能研究。

別名：RHA、DDX9、NDH II、NDH2、NDHII、核DNA解旋酶II、白鎖蛋白（LKP）。

生產(chǎn)與純化流程

1. 免疫原設(shè)計(jì)：選擇人DHX9蛋白C末端第1220–1270位之間的合成肽段（該區(qū)域在DEAH家族中具有相對(duì)特異性）

2. 免疫方案：免疫兔，誘導(dǎo)產(chǎn)生多克隆抗血清

3. 親和純化：將表位特異性肽段固定在固相支持物上，從抗血清中親和捕獲特異性抗體，去除與其他DEAH家族成員的非特異性交叉反應(yīng)

4. 濃度標(biāo)定：A280法，1 mg/mL對(duì)應(yīng)吸光值1.4

5. 緩沖體系：Tris緩沖鹽水（TBS）含0.1% BSA作為穩(wěn)定蛋白，0.09%疊d化鈉作為防腐劑

注：本品濃度較低（200 µg/mL），但經(jīng)親和純化后特異性高，推薦稀釋倍數(shù)在WB中可達(dá)1:2,000–1:10,000，IHC中可達(dá)1:100–1:500，IP中需按體積計(jì)算用量（30 µL/mg裂解液）。

適用范圍與推薦使用條件

> 重要說(shuō)明：本抗體經(jīng)驗(yàn)證適用于IHC、IP和WB。所有WB實(shí)驗(yàn)采用統(tǒng)一封閉和稀釋條件（5%牛奶-TBST，一抗過(guò)夜）。IHC推薦進(jìn)行抗原修復(fù)。

應(yīng)用技術(shù) 推薦使用條件 備注

免疫組織化學(xué)（IHC） 1:100 – 1:500 FFPE切片需用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行抗原修復(fù)

免疫沉淀（IP） 6 µg抗體/毫克裂解液 按總蛋白質(zhì)量計(jì)算抗體用量

蛋白質(zhì)印跡（WB） 1:2,000 – 1:10,000 推薦起始稀釋度1:5,000

濃度換算：本品濃度為200 µg/mL，即0.2 µg/µL。進(jìn)行IP時(shí)，如需6 µg抗體/毫克裂解液，則需加入30 µL抗體原液/毫克裂解液。

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存條件：

溫度：2–8°C（嚴(yán)禁冷凍）

防腐劑：0.09%疊d化鈉

穩(wěn)定蛋白：0.1% BSA防止低濃度抗體吸附損失

分裝建議：本品濃度較低，建議避免頻繁開(kāi)蓋，可分裝為50 µL/管，仍?xún)?chǔ)存于2–8°C

有效期：自收貨起12個(gè)月。

操作優(yōu)化與常見(jiàn)問(wèn)題排查

問(wèn)題現(xiàn)象 可能原因 解決方案

WB無(wú)信號(hào)或信號(hào)弱 上樣量不足；一抗稀釋度過(guò)高 增加上樣量至40–50 µg；降低一抗稀釋度至1:2,000

WB出現(xiàn)高分子量彌散帶 蛋白聚集或降解 新鮮制備裂解液，煮沸時(shí)間延長(zhǎng)至10分鐘

IHC無(wú)染色 抗原修復(fù)不充分；一抗稀釋度過(guò)高 確保檸檬酸緩沖液pH 6.0并加熱至沸騰；提高一抗?jié)舛戎?:100

IHC背景高 封閉不足；二抗交叉反應(yīng) 延長(zhǎng)封閉時(shí)間至1小時(shí)；使用5%正常血清封閉；增加洗滌次數(shù)

IP下拉效率低 抗體用量不足（200 µg/mL需加體積較大） 增加抗體至10 µg/mg（50 µL/mg）；確保裂解液中無(wú)SDS

IP-WB出現(xiàn)55 kDa強(qiáng)條帶（如檢測(cè)互作蛋白） 重鏈干擾 改用抗兔輕鏈HRP二抗+5%正常豬血清

陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞系：

HeLa、293T、HepG2等常見(jiàn)細(xì)胞系均高表達(dá)DHX9，無(wú)需特殊處理

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)總結(jié)

特性 功能優(yōu)勢(shì)

C末端特異性（1220–1270） 識(shí)別DHX9獨(dú)特C端區(qū)域，避免與DEAH家族其他成員交叉反應(yīng)

親和純化 低背景高信噪比，適用于IP-MS和ChIP等高級(jí)應(yīng)用

三重應(yīng)用驗(yàn)證（IHC/IP/WB） 同一抗體覆蓋蛋白表達(dá)、定位和互作分析，實(shí)驗(yàn)連貫性強(qiáng)

低濃度高效價(jià) 200 µg/mL仍支持WB達(dá)1:10,000，IHC達(dá)1:500，經(jīng)濟(jì)效益高

含BSA穩(wěn)定劑 防止稀釋抗體在儲(chǔ)存期吸附損耗

IHC經(jīng)驗(yàn)證方案 提供檸檬酸pH 6.0抗原修復(fù)條件，節(jié)省優(yōu)化時(shí)間