本抗體為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源多克隆抗體（貨號(hào)：A300-613A），特異性識(shí)別小鼠c-Maf轉(zhuǎn)錄因子的第150–200位氨基酸區(qū)域。經(jīng)抗原親和純化，提供完整IgG分子形式，未偶聯(lián)任何標(biāo)記物（Unconjugated），濃度為1000 µg/mL（1 mg/mL）。適用于Western blot（WB）檢測(cè)，反應(yīng)種屬為小鼠。

產(chǎn)品規(guī)格與理化參數(shù)

參數(shù)項(xiàng)目 詳細(xì)規(guī)格

目標(biāo)抗原 c-Maf（v-maf肌腱膜纖維肉瘤癌基因同源物）

反應(yīng)種屬 小鼠

宿主來源 兔

克隆類型 多克隆

抗體形式 完整IgG

免疫原 第150–200位氨基酸之間的區(qū)域

亞型 IgG

偶聯(lián)物 無

純度 抗原親和純化

抗原物種 小鼠

濃度 1000 µg/mL（1 mg/mL）

保存條件 2–8 °C

有效期限 自收貨起1年

緩沖體系 Tris-枸櫞酸-磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

濃度測(cè)定依據(jù)：采用比爾定律（Beer’s Law），標(biāo)準(zhǔn)為1 mg/mL IgG在280 nm波長(zhǎng)處的吸光值（A280）為1.4。

抗原背景：c-Maf轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)與功能

c-Maf是Maf轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一，該家族蛋白均含有一個(gè)高度保守的堿性區(qū)域和亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域（bZIP），介導(dǎo)DNA結(jié)合和蛋白-蛋白相互作用。c-Maf在組織特異性基因調(diào)控和細(xì)胞分化中發(fā)揮重要作用。

核心功能：

免疫調(diào)節(jié)：在T細(xì)胞中，c-Maf是白細(xì)胞介素-4（IL-4）和白細(xì)胞介素-10（IL-10）的轉(zhuǎn)錄激活因子，參與Th2細(xì)胞分化

發(fā)育調(diào)控：參與晶狀體纖維細(xì)胞分化，對(duì)眼晶狀體的正常發(fā)育至關(guān)重要

癌基因潛能：c-Maf易位已在人多發(fā)性骨髓瘤中被發(fā)現(xiàn)，可能具有致癌活性

結(jié)構(gòu)特征：

N端轉(zhuǎn)錄激活域（含本抗體識(shí)別的150–200區(qū)段）

C端bZIP域（堿性區(qū)+亮氨酸拉鏈），介導(dǎo)二聚化及與DNA的MARE位點(diǎn)結(jié)合

本抗體的靶向優(yōu)勢(shì)：識(shí)別第150–200位氨基酸區(qū)域，位于激活域中段，可檢測(cè)內(nèi)源性全長(zhǎng)c-Maf蛋白（分子量約45–50 kDa，不同剪接變體略有差異），且能區(qū)分c-Maf與其他Maf家族成員。

別名：c-Maf、c-Maf長(zhǎng)形式、原癌基因c-Maf、2810401A20Rik、A230108G15Rik、AW047063等。

適用范圍與推薦使用條件

> 重要說明：本抗體經(jīng)測(cè)試僅確認(rèn)用于Western blot（WB）應(yīng)用。其他應(yīng)用（如IP、IHC、ICC）尚未由生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，但可能有效，用戶需自行優(yōu)化。

應(yīng)用技術(shù) 推薦使用條件 備注

蛋白質(zhì)印跡（WB） 1:1,000 – 1:10,000 推薦起始稀釋度1:2,000–1:5,000

注：本品僅保證小鼠樣本的反應(yīng)性。對(duì)于其他種屬（如人、大鼠），建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

標(biāo)準(zhǔn)WB流程（細(xì)胞裂解液或組織勻漿）

樣本制備：

使用含蛋白酶抑制劑（PMSF、亮肽素、抑肽酶）的RIPA或NP-40裂解液提取總蛋白

c-Maf為核轉(zhuǎn)錄因子，建議使用核蛋白提取試劑盒或高鹽裂解液（如含0.4 M NaCl的緩沖液）富集核組分，以提高檢測(cè)靈敏度

蛋白濃度定量后，加入SDS上樣緩沖液（含DTT或β-巰基乙醇），95°C煮沸5–10分鐘

凝膠電泳：

c-Maf分子量約45–50 kDa（小鼠c-Maf長(zhǎng)形式約48 kDa）

推薦使用10% SDS-PAGE分離膠，可清晰分離c-Maf條帶

上樣量：細(xì)胞裂解液建議30–50 µg總蛋白/泳道；核蛋白提取物建議10–20 µg/泳道

轉(zhuǎn)膜：

PVDF膜（需甲醇活化）或硝酸纖維素膜

濕轉(zhuǎn)條件：恒流250–300 mA，90–120分鐘（冰?。换虬敫赊D(zhuǎn)條件：15–20 V，30–45分鐘

轉(zhuǎn)膜后可用麗春紅染色確認(rèn)轉(zhuǎn)膜效率和蛋白上樣量

封閉（生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室參數(shù)）：

封閉液：5% 脫脂牛奶-TBST（TBS含0.05–0.1% Tween-20）

封閉條件：室溫?fù)u床孵育1小時(shí)

一抗孵育（生產(chǎn)實(shí)驗(yàn)室參數(shù)）：

稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST（與封閉液一致）

稀釋度：1:1,000 – 1:10,000（推薦起始1:2,000–1:5,000）

孵育條件：4°C過夜（或室溫?fù)u床2小時(shí)）

注意：過夜孵育可顯著增強(qiáng)低豐度c-Maf的檢測(cè)信號(hào)

洗滌：

TBST洗滌3次，每次10分鐘

二抗孵育：

二抗：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）HRP偶聯(lián)抗體，貨號(hào) A120-101P（或其他等效產(chǎn)品）

稀釋度：按廠商推薦（通常1:5,000–1:20,000），使用5%牛奶-TBST稀釋

孵育條件：室溫?fù)u床1小時(shí)

洗滌：TBST洗滌3–5次，每次10分鐘

檢測(cè)：

化學(xué)發(fā)光法（ECL），使用X光膠片或化學(xué)發(fā)光成像儀顯影

c-Maf表達(dá)水平在多數(shù)細(xì)胞系中較低，可能需要延長(zhǎng)曝光時(shí)間（1–10分鐘）

陽(yáng)性對(duì)照與樣本選擇

推薦的陽(yáng)性對(duì)照樣本：

小鼠脾臟組織裂解液：T細(xì)胞中c-Maf表達(dá)較高，脾臟富含T細(xì)胞

小鼠Th2細(xì)胞：在體外分化的小鼠Th2細(xì)胞中，c-Maf被強(qiáng)烈誘導(dǎo)表達(dá)

小鼠晶狀體組織：晶狀體纖維細(xì)胞高表達(dá)c-Maf

某些小鼠骨髓瘤細(xì)胞系：如NS-1、P3X63Ag8等可能表達(dá)c-Maf（需驗(yàn)證）

推薦的刺激條件：

初始CD4+ T細(xì)胞在抗CD3/CD28刺激下，加入IL-4可誘導(dǎo)c-Maf表達(dá)（24–48小時(shí)）

陰性對(duì)照：

使用兔同型對(duì)照IgG替代一抗

使用已知不表達(dá)c-Maf的細(xì)胞系（如未活化的初始CD4+ T細(xì)胞）

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存條件：

溫度：2–8°C（嚴(yán)禁冷凍，冷凍會(huì)導(dǎo)致抗體蛋白變性及活性喪失）

防腐劑：0.09%疊d化鈉，有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)

分裝建議：本品濃度為1 mg/mL，體積適中。如需避免反復(fù)取用污染，可無菌分裝為10–20 µL/管，仍儲(chǔ)存于2–8°C（不建議-20°C）

有效期：自收貨之日起12個(gè)月。超過有效期后使用，建議重新驗(yàn)證效價(jià)（如通過WB檢測(cè)陽(yáng)性對(duì)照樣本）。