產(chǎn)品核心信息

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的抗人Kappa輕鏈抗體（貨號(hào)：A80-115P）是一款以山羊?yàn)樗拗髦苽涞亩嗫寺】贵w，經(jīng)抗原親和純化獲得高純度Whole IgG。該抗體特異性識(shí)別所有人免疫球蛋白中的Kappa輕鏈，適用于ELISA、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、免疫組化（IHC）及免疫印跡（WB）檢測(cè)。主要規(guī)格參數(shù)如下：

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶點(diǎn) 人Kappa輕鏈

反應(yīng)性 人

宿主 山羊

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

濃度 1 mg/ml

純化方式 抗原親和純化（瓊脂糖珠偶聯(lián)抗原）

同種型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

緩沖液 PBS，含0.09%疊d化鈉

儲(chǔ)存 2 - 8°C

有效期 2年（自收貨之日起）

免疫原與特異性

該抗體通過(guò)親和層析技術(shù)純化，使用固定于瓊脂糖珠上的人Kappa輕鏈作為配基?？贵w濃度采用比爾定律測(cè)定，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4為標(biāo)準(zhǔn)。

特異性驗(yàn)證（經(jīng)免疫電泳和ELISA確認(rèn)）：

特異性識(shí)別所有人免疫球蛋白中的Kappa輕鏈

與Lambda輕鏈無(wú)交叉反應(yīng)

與非免疫球蛋白血清蛋白無(wú)交叉反應(yīng)

可能與其他物種的Kappa輕鏈發(fā)生交叉反應(yīng)（未經(jīng)系統(tǒng)驗(yàn)證）

技術(shù)優(yōu)勢(shì)：該抗體的純化策略確保了Kappa輕鏈表位的完整保留，同時(shí)去除了針對(duì)其他血清蛋白或Lambda輕鏈的非特異性抗體。作為多克隆抗體，其可識(shí)別Kappa輕鏈上的多個(gè)抗原表位，因此在不同實(shí)驗(yàn)體系中均表現(xiàn)出高靈敏度和寬動(dòng)態(tài)范圍。

儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

儲(chǔ)存條件：2 - 8°C。請(qǐng)勿冷凍，冷凍會(huì)導(dǎo)致蛋白變性和效價(jià)下降。

有效期：自收貨之日起2年，在推薦的儲(chǔ)存條件下保持穩(wěn)定。

緩沖液體系：磷酸鹽緩沖鹽水（PBS），含0.09%疊d化鈉作為防腐劑。使用前無(wú)需稀釋，直接按推薦比例加入實(shí)驗(yàn)體系。

應(yīng)用范圍與推薦參數(shù)

該抗體在ELISA、ICC、IHC及WB四種主要應(yīng)用中均表現(xiàn)良好。注意：部分應(yīng)用未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室逐一驗(yàn)證，建議用戶初次使用時(shí)進(jìn)行梯度優(yōu)化。

應(yīng)用 推薦稀釋比 特殊說(shuō)明

ELISA 檢測(cè)：1:1000 - 1:30,000<br>包被：1:100 - 1:500 作為檢測(cè)抗體時(shí)，推薦使用高稀釋比（1:5000-1:20000）；作為包被抗體時(shí)，使用較低稀釋比（1:100-1:500）。

免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC） 1:200 - 1:2000 可用于檢測(cè)細(xì)胞表面或胞內(nèi)Kappa輕鏈。固定和通透條件需根據(jù)細(xì)胞類型優(yōu)化。

免疫組化（IHC） 1:200 - 1:2000 適用于福爾馬林固定、石蠟包埋組織切片。推薦進(jìn)行抗原修復(fù)（枸櫞酸鹽緩沖液pH 6.0或Tris-EDTA pH 9.0）。

免疫印跡（WB） 1:1000 - 1:30,000 還原或非還原條件下均可使用。注意Kappa輕鏈在還原SDS-PAGE中遷移至約25 kDa。

詳細(xì)實(shí)驗(yàn)建議

ELISA：

作為檢測(cè)抗體：將抗體稀釋于含0.1% BSA和0.05% Tween-20的PBS中，室溫孵育1-2小時(shí)。推薦起始稀釋比1:5000，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度向上或向下調(diào)整。

作為包被抗體：用碳酸鹽緩沖液（pH 9.6）稀釋至1-5 µg/ml，4°C過(guò)夜包被。本抗體1 mg/ml濃度，1:500稀釋即為2 µg/ml。

免疫印跡（WB）：

Kappa輕鏈在非還原條件下以與重鏈結(jié)合的形式存在（約150 kDa），在還原條件下（含β-巰基乙醇或DTT）則解離為約25 kDa的游離輕鏈。用戶應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇還原或非還原電泳條件。

推薦使用5% Milk-TBST封閉，一抗稀釋于封閉液中，4°C孵育過(guò)夜。起始稀釋比1:5000。

陽(yáng)性對(duì)照：人IgG（還原處理后）或多發(fā)性骨髓瘤患者血清。

免疫組化（IHC）：

可用于檢測(cè)組織切片中表達(dá)Kappa輕鏈的漿細(xì)胞。推薦使用石蠟包埋的扁桃體或淋巴組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

抗原修復(fù)：建議使用枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）微波加熱15-20分鐘，或使用壓力鍋加熱5分鐘。

一抗稀釋于含1% BSA的PBS中，4°C孵育過(guò)夜，起始稀釋比1:500。

檢測(cè)系統(tǒng)推薦使用HRP/AP標(biāo)記的兔抗山羊二抗，配合DAB或AEC顯色。

免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）：

用于培養(yǎng)細(xì)胞（如B淋巴細(xì)胞或漿細(xì)胞系）中Kappa輕鏈的定位。細(xì)胞可用4%甲醛固定10-15分鐘，0.1% Triton X-100通透5分鐘。

一抗稀釋比1:500-1:1000，4°C孵育過(guò)夜。熒光標(biāo)記的二抗（如Alexa Fluor 488兔抗山羊IgG）適用于共聚焦顯微成像。

使用注意事項(xiàng)

1. 防腐劑：緩沖液含0.09%疊d化鈉，具毒性。操作時(shí)需佩戴手套和護(hù)目鏡，避免皮膚接觸。疊d化鈉會(huì)抑制HRP活性，若用于HRP檢測(cè)系統(tǒng)（如WB、ELISA、IHC中的HRP二抗），需確保在封閉和洗滌步驟中充分去除（增加洗滌次數(shù)）。也可考慮換用不含疊d化鈉的緩沖液重新稀釋抗體。

2. 凍融限制：該抗體應(yīng)始終儲(chǔ)存于2-8°C，不可冷凍。冷凍會(huì)導(dǎo)致抗體聚集和活性喪失。如已冷凍，不建議使用。

3. 稀釋液匹配：不同實(shí)驗(yàn)體系推薦的稀釋液不同：

WB/ELISA檢測(cè)：推薦使用5% Milk-TBST或含1% BSA的PBS-T。

IHC/ICC：推薦使用含1-2%正常血清（來(lái)自二抗宿主，如兔或馬）和0.1% BSA的PBS。

4. 陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置：

WB：還原處理的人IgG標(biāo)準(zhǔn)品，或多發(fā)性骨髓瘤患者血清/尿液。

IHC：人扁桃體組織切片（生發(fā)中心漿細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性）。

ICC：人漿細(xì)胞系（如U266、RPMI-8226）。

5. 陰性對(duì)照：

使用同型對(duì)照山羊IgG（非特異性）。

使用僅加二抗的空白對(duì)照。

使用已知Lambda輕鏈陽(yáng)性的樣本驗(yàn)證特異性。

6. 交叉反應(yīng)驗(yàn)證：如需檢測(cè)小鼠或其它物種樣本，建議通過(guò)WB預(yù)先驗(yàn)證。可同時(shí)使用該抗體和物種特異性Kappa輕鏈抗體進(jìn)行平行比較。