產品核心規(guī)格

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的抗KIF4A抗體（貨號A301-074A）是一款靶向驅動蛋白家族成員4A（KIF4A）的兔多克隆抗體。該抗體經抗原親和純化，以Whole IgG形式提供，未偶聯(lián)標記，適用于免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）檢測人源樣本。關鍵參數(shù)匯總如下：

參數(shù) 詳細信息

靶點 KIF4A（驅動蛋白家族成員4A）

反應性 人

應用 IP、WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

格式 Whole IgG

濃度 200 µg/ml

純化方式 抗原親和純化

同種型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

免疫原與表位特異性

該抗體通過針對人KIF4A蛋白C末端區(qū)域的特異性表位進行親和純化獲得。具體而言，識別表位位于第1182位殘基與C末端（第1232位殘基）之間，參考序列編號基于NP_036442.3（GeneID 24137）。免疫原為人KIF4A蛋白的該區(qū)域。

技術要點：KIF4A的C末端區(qū)域（1182-1232位）包含參與貨物結合、蛋白相互作用及亞細胞定位的關鍵序列。該區(qū)域在驅動蛋白超家族中相對特異，靶向此區(qū)域的抗體可減少與其他KIF家族成員（如KIF4B、KIF14等）的交叉反應。生產中采用固相固定化表位親和純化，確保高特異性和低背景?？贵w濃度通過比爾定律測定，以1 mg/ml IgG在A280吸光度1.4為標準。

儲存與穩(wěn)定性

儲存條件：2 8°C

有效期：自收貨之日起1年

緩沖液組成：Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉（防腐劑）

應用與實驗方案

通用方法

所有免疫印跡實驗均使用5% Milk-TBST作為封閉液和抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜（推薦4°C搖動孵育）。

檢測體系

實驗類型 推薦檢測抗體

細胞裂解液Western Blot 羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀物Western Blot 抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體，封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

推薦工作濃度

應用 推薦稀釋度/用量

免疫沉淀（IP） 6 µg/mg裂解物

免疫印跡（WB） 1:2000 1:10000

詳細實驗提示：

免疫印跡（WB）：推薦起始稀釋比為1:2000。KIF4A分子量約為140 kDa，在多數(shù)人細胞系（如HeLa、HEK293T）中表達水平中等。若信號過強可提高至1:5000-1:10000；若信號弱可降至1:1000。建議使用HeLa細胞全裂解液作為陽性對照。轉膜后使用5% Milk-TBST室溫封閉1小時，一抗4°C孵育過夜，二抗室溫孵育1小時，ECL化學發(fā)光檢測。注意KIF4A可能存在磷酸化修飾導致遷移率改變，預期條帶位置可能在130-150 kDa范圍。

免疫沉淀（IP）：按照6 µg抗體/mg總蛋白裂解物的比例加入抗體。推薦使用非變性裂解液（如含50 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5%脫氧膽酸鈉及蛋白酶抑制劑）制備裂解物。抗體與裂解物在4°C旋轉孵育2-4小時或過夜，然后加入Protein A/G磁珠，繼續(xù)孵育1-2小時。用裂解緩沖液洗滌3-5次后，用1× SDS上樣緩沖液95°C加熱5分鐘洗脫免疫復合物，用于后續(xù)WB分析。

IP后WB檢測：推薦使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體（配合5%正常豬血清封閉）進行檢測，以避免兔IgG重鏈信號（約55 kDa）的干擾。盡管KIF4A分子量（~140 kDa）與重鏈距離較遠，但使用輕鏈特異性二抗可進一步降低背景，尤其當分析IP洗脫液中可能存在的非特異性沉淀時。注意：若使用常規(guī)抗兔HRP二抗（識別重鏈和輕鏈），則在目標條帶附近不會有重鏈干擾，但可能出現(xiàn)輕鏈（~25 kDa）的非特異信號，通常不影響140 kDa檢測。

別名

Chromokinesin-A、chromosome-associated kinesin KIF4A、KIF4、KIF4G1、MRX100

使用注意事項

1. 防腐劑安全：緩沖液含0.09%疊d化鈉，有毒，操作時需佩戴手套和護目鏡。疊d化鈉會抑制HRP活性，若使用HRP偶聯(lián)二抗，應在封閉和洗滌步驟中確保充分去除殘留（可通過增加洗滌次數(shù)或使用不含疊d化鈉的緩沖液稀釋抗體）。

2. 稀釋優(yōu)化：不同細胞系中KIF4A表達水平差異顯著。有絲分裂同步化細胞中KIF4A高表達，而靜止期細胞中極低。推薦使用同步化細胞（如雙胸腺嘧啶阻斷或諾考達唑處理釋放后的有絲分裂細胞）作為陽性對照。正式實驗前進行梯度稀釋（WB：1:1000、1:2000、1:5000、1:10000）以確定最佳信噪比。

3. 分子量確認：KIF4A預測分子量約140 kDa，但實際遷移可能受磷酸化、泛素化等修飾影響。在SDS-PAGE中可能出現(xiàn)130-150 kDa范圍內的多個條帶，尤其在有絲分裂細胞中磷酸化異構體可能產生遷移滯后。建議使用磷酸酶處理裂解物輔助條帶鑒定。

4. IP條件優(yōu)化：由于KIF4A參與多種蛋白復合物，建議使用溫和裂解緩沖液（如含0.5-1% NP-40，不含SDS）以保持相互作用。同時設置兔IgG同型對照作為陰性對照。洗滌步驟需充分，以減少非特異性結合。

5. 交叉反應性：已驗證人反應性。經序列比對，小鼠Kif4a（NP_032476.2）C末端區(qū)域（1182-1232）與人KIF4A的同源性約為65%，該抗體對小鼠樣本的交叉反應性未經驗證。如需檢測小鼠樣本，建議預先通過WB驗證。此外，KIF4B是KIF4A的旁系同源物，C末端差異較大，交叉反應可能性低。

6. 胞質分裂實驗中的注意事項：研究胞質分裂時，建議使用免疫熒光結合本抗體進行定位分析（雖然應用列表中未標注IHC/IF，但可自行嘗試，需優(yōu)化條件）。同步化后釋放不同時間點取樣，觀察KIF4A在中體的聚集。