產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗KIF18A多克隆抗體（貨號：A301-080A），采用表位特異性親和純化工藝制備，以完整IgG形式提供。該抗體針對人KIF18A蛋白C端區(qū)域（第848位氨基酸至C末端，即第898位）設(shè)計，能夠特異性識別全長KIF18A，適用于人源樣本的免疫檢測。KIF18A是驅(qū)動蛋白超家族成員之一，作為微管解聚酶，在有絲分裂紡錘體組裝、染色體整列及紡錘體 equator 定位中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用。本抗體經(jīng)驗證適用于IP及WB應(yīng)用，是研究細(xì)胞周期、有絲分裂進(jìn)程及腫瘤增殖機(jī)制的重要工具。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 具體信息

靶標(biāo) | KIF18A

反應(yīng)種屬 | 人

應(yīng)用 | IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 第848位至C末端（第898位）

亞型 | IgG

標(biāo)記物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）

儲存 | 2 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊d化鈉

儲存與穩(wěn)定性

儲存溫度：2 8 °C

有效期：1年

緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8），含0.09%疊d化鈉

疊d化鈉作為防腐劑存在。在使用HRP標(biāo)記二抗進(jìn)行檢測時，需注意疊d化鈉對過氧化物酶的抑制作用。如需進(jìn)行細(xì)胞活性實驗或功能性研究（如抗體顯微注射），必須通過透析或超濾去除疊d化鈉。

推薦應(yīng)用與稀釋度

以下為經(jīng)過驗證的應(yīng)用條件：

應(yīng)用類型 | 推薦稀釋度/用量 | 關(guān)鍵條件

免疫沉淀（IP） | 6 µg/mg裂解物 | 每毫克總蛋白裂解液使用6 µg抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:2,000 1:10,000 | 5% Milk-TBST封閉和稀釋，一抗孵育過夜

特別說明：本抗體未經(jīng)IHC或ICC測試驗證。如需用于免疫染色，建議自行優(yōu)化或選擇已驗證的替代產(chǎn)品。

KIF18A生物學(xué)背景與應(yīng)用價值

KIF18A在有絲分裂中的核心功能

驅(qū)動蛋白超家族包含40余種KIF馬達(dá)蛋白，沿微管參與細(xì)胞內(nèi)運輸。KIF18A屬于驅(qū)動蛋白-8家族，其獨特之處在于微管解聚酶活性，而非傳統(tǒng)驅(qū)動蛋白的運輸功能。

1. 染色體整列（Chromosome Congression）

KIF18A定位于紡錘體微管的正端，通過調(diào)控微管動態(tài)不穩(wěn)定性，限制染色體在紡錘體 equatorial plate 的過度擺動，確保染色體正確整列。KIF18A缺失導(dǎo)致染色體不能正常排列在中期板，出現(xiàn)滯后染色體和多極分裂。

2. 紡錘體長度調(diào)控

KIF18A通過持續(xù)去聚合紡錘體微管，限制紡錘體的長度。這一功能確保了染色體在合適距離內(nèi)被微管捕獲和排列。

3. 有絲分裂檢查點適應(yīng)性

KIF18A參與紡錘體組裝檢查點（SAC）的沉默過程。當(dāng)所有染色體正確整列后，KIF18A活性有助于解除SAC，促進(jìn)后期的啟動。

4. 與磷酸化調(diào)控的關(guān)聯(lián)

KIF18A的別名PPP1R99提示其可作為蛋白磷酸酶1（PP1）的調(diào)控亞基。通過PP1募集，KIF18A可能參與去磷酸化事件，調(diào)控有絲分裂底物。

疾病及治療相關(guān)性

腫瘤過表達(dá)：KIF18A在多種實體腫瘤（乳腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌、卵巢癌、膠質(zhì)瘤）中顯著上調(diào)，高表達(dá)與患者不良預(yù)后及化療耐藥相關(guān)。

抗有絲分裂藥物靶點：由于KIF18A在有絲分裂中的關(guān)鍵作用，且正常組織與增殖組織表達(dá)差異明顯，KIF18A已成為新型抗有絲分裂藥物開發(fā)的潛在靶點（規(guī)避傳統(tǒng)紫杉烷類藥物對微管的非特異性毒副作用）。

著絲粒/動粒功能研究：KIF18A功能缺陷導(dǎo)致染色體不穩(wěn)定（CIN），是腫瘤遺傳異質(zhì)性的驅(qū)動因素之一。

實驗操作注意事項

1. 細(xì)胞周期同步化優(yōu)化：KIF18A表達(dá)具有細(xì)胞周期依賴性，在G2/M期（尤其是M期）表達(dá)最高。如需檢測內(nèi)源KIF18A，建議使用雙胸腺嘧啶阻斷或諾考達(dá)唑同步化后釋放收集有絲分裂細(xì)胞，以提高檢測靈敏度。

2. 使用前處理：輕柔混勻，避免劇烈振蕩。長期保存后可能出現(xiàn)微量沉淀，建議12,000 × g離心2分鐘去除聚集物。

3. 稀釋液選擇：WB必須使用5% Milk-TBST。避免使用BSA作為封閉劑，某些批次的BSA可能含有IgG，但不影響本體系，但Milk效果更佳。

4. 疊d化鈉處理：如需將抗體用于細(xì)胞顯微注射或功能性抑制實驗，必須通過透析或超濾去除疊d化鈉。否則僅限用于固定或裂解后的樣本檢測。

5. 分裝建議：由于有效期僅為1年，建議收到后分裝為10-20 µl/管，儲存于2-8°C，嚴(yán)禁冷凍。

6. 微管互作研究注意事項：如計劃研究KIF18A與微管的結(jié)合，裂解液中需添加微管穩(wěn)定劑（如紫杉醇10 µM、GTP 1 mM）和去聚合抑制劑。常規(guī)裂解液（含0.5% NP-40）會使微管解聚，導(dǎo)致KIF18A從微管上釋放。

相關(guān)產(chǎn)品推薦

抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體——用于IP產(chǎn)物的WB檢測

山羊抗兔IgG（H+L）HRP——用于常規(guī)細(xì)胞裂解液WB檢測

諾考達(dá)唑（nocodazole）——用于有絲分裂同步化處理，富集M期細(xì)胞

HeLa或U2OS細(xì)胞裂解液（有絲分裂期富集）——KIF18A高表達(dá)陽性對照