產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗RIF1多克隆抗體（貨號：A300-568A），采用表位特異性親和純化工藝制備，以完整IgG形式提供。該抗體針對人RIF1蛋白第1425至1450位氨基酸之間的表位設(shè)計，能夠特異性識別全長RIF1，適用于人源樣本的免疫檢測。RIF1（Rap1相互作用因子1）是DNA損傷應(yīng)答和端粒穩(wěn)態(tài)維持的關(guān)鍵調(diào)控蛋白，參與ATM/ATR介導(dǎo)的信號通路，在S期檢查點控制及雙鏈斷裂修復(fù)中發(fā)揮核心作用。本抗體經(jīng)驗證適用于IHC、IP及WB等多種應(yīng)用。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) | 具體信息

靶標(biāo) | RIF1

反應(yīng)種屬 | 人

應(yīng)用 | IHC、IP、WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | RIF1第1425至1475位氨基酸（核心表位位于1425-1450）

亞型 | IgG

標(biāo)記物 | 未偶聯(lián)

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 µg/ml（1 mg/ml）

儲存 | 2 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊d化鈉

儲存與穩(wěn)定性

儲存溫度：2 8 °C

有效期：1年

緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8），含0.09%疊d化鈉

疊d化鈉作為防腐劑存在。在使用HRP標(biāo)記二抗進(jìn)行檢測時，需注意疊d化鈉對過氧化物酶的抑制作用。如需進(jìn)行細(xì)胞活性實驗或功能性研究，建議通過透析或超濾去除疊d化鈉。

推薦應(yīng)用與稀釋度

以下為經(jīng)過驗證或推薦的應(yīng)用條件：

應(yīng)用類型 | 推薦稀釋度/用量 | 關(guān)鍵條件

免疫組織化學(xué)（IHC） | 1:500 1:2,000 | 推薦使用檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0進(jìn)行抗原修復(fù)（FFPE切片）

免疫沉淀（IP） | 6 µg/mg裂解物 | 每毫克總蛋白裂解液使用6 µg抗體

蛋白質(zhì)印跡（WB） | 1:10,000 1:25,000 | 推薦使用3-8% Tris-醋酸凝膠；5% Milk-TBST封閉和稀釋

RIF1的核心生物學(xué)功能

RIF1最初在酵母中被鑒定為端粒結(jié)合蛋白RAP1的相互作用因子，參與端粒長度調(diào)控。在人細(xì)胞中，RIF1的功能已擴(kuò)展至多個DNA代謝領(lǐng)域：

1. DNA雙鏈斷裂修復(fù)調(diào)控

RIF1是ATM和ATR介導(dǎo)的DNA損傷應(yīng)答通路的關(guān)鍵下游效應(yīng)因子。在發(fā)生雙鏈斷裂（DSB）后，RIF1迅速被招募至損傷位點形成核內(nèi)焦點。這一過程w全依賴于ATM激酶活性——ATM磷酸化RIF1或其上游調(diào)控蛋白，促進(jìn)RIF1的損傷位點定位。

2. 53BP1通路的效應(yīng)因子

RIF1與53BP1協(xié)同作用，在G1期促進(jìn)DNA末端連接（經(jīng)典非同源末端連接，c-NHEJ），同時抑制同源重組修復(fù)。RIF1通過調(diào)控修復(fù)通路選擇，對基因組穩(wěn)定性維持至關(guān)重要。

3. 復(fù)制時序調(diào)控

RIF1參與調(diào)控DNA復(fù)制的時空程序。它影響復(fù)制起點的激活時序，確?；蚪M的不同區(qū)域在S期正確的時間段完成復(fù)制。RIF1缺失導(dǎo)致復(fù)制時序紊亂，基因組不穩(wěn)定性增加。

4. 端粒穩(wěn)態(tài)維持

在端粒功能失調(diào)時，RIF1定位于端粒末端，參與端粒保護(hù)及端粒延長替代機(jī)制（ALT）的調(diào)控。

疾病相關(guān)性

腫瘤發(fā)生：RIF1在多種癌癥中表達(dá)異常，其過表達(dá)或缺失均可導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展

化療耐藥：RIF1通過促進(jìn)NHEJ修復(fù)，參與腫瘤細(xì)胞對DNA損傷性化療藥物（如PARP抑制劑、鉑類藥物）的抵抗

發(fā)育異常：RIF1功能缺陷與胚胎致死及發(fā)育異常相關(guān)

常見問題與解決方案

問題 | 可能原因 | 建議措施

WB無270 kDa條帶 | 凝膠體系不適用于大蛋白 | 更換為3-8% Tris-醋酸凝膠；使用大蛋白專用轉(zhuǎn)印條件

出現(xiàn)多條非預(yù)期條帶（~150-200 kDa） | RIF1降解或非特異性結(jié)合 | 使用新鮮制備的裂解液，添加廣譜蛋白酶抑制劑混合物；提高一抗稀釋度至1:20,000

IP下拉產(chǎn)物中RIF1信號弱 | RIF1分子量大，洗脫/轉(zhuǎn)印效率低 | 增加IP抗體用量至10 µg/mg；洗脫后上樣前不離心；使用大蛋白WB條件

IHC無核染色 | 抗原修復(fù)不當(dāng)或組織固定過度 | 確保檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0用于熱修復(fù)；嘗試使用蛋白酶K消化作為替代方案；縮短固定時間

IHC焦點狀染色無法觀察 | 未對細(xì)胞施加DNA損傷處理 | RIF1在正常細(xì)胞中為彌散核染色，DNA損傷處理后出現(xiàn)點狀焦點

相關(guān)產(chǎn)品推薦

抗兔IgG輕鏈HRP偶聯(lián)抗體——用于IP產(chǎn)物的WB檢測

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DNA損傷劑（依托泊苷、喜樹堿、順鉑）——用于誘導(dǎo)RIF1焦點形成及功能驗證

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