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產(chǎn)品概述
本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗MCM5多克隆抗體(貨號(hào):A300-195A),采用表位特異性親和純化工藝制備,以完整IgG形式提供。該抗體針對(duì)人MCM5蛋白N端第1至50位氨基酸殘基之間的表位設(shè)計(jì),能夠特異性識(shí)別MCM5而不受MCM復(fù)合物中其他亞基(MCM2、3、4、6、7)的干擾。該抗體適用于人源及小鼠源樣本的檢測(cè),在DNA復(fù)制、細(xì)胞周期調(diào)控及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等研究領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。
MCM5(微小染色體維持復(fù)合物組分5)是MCM復(fù)合物(MCM2-7六聚體)的核心亞基之一。該復(fù)合物作為復(fù)制許可的關(guān)鍵調(diào)控因子,確保真核細(xì)胞DNA在每個(gè)細(xì)胞周期中僅復(fù)制一次。此外,MCM5還參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控,與STAT1相互作用,對(duì)干擾素誘導(dǎo)的靶基因轉(zhuǎn)錄具有bi要的作用。
核心規(guī)格參數(shù)
參數(shù) | 具體信息
靶標(biāo) | MCM5
反應(yīng)種屬 | 小鼠、人
應(yīng)用 | IHC、IP、WB
宿主 | 兔
克隆性 | 多克隆
抗體形式 | 完整IgG
免疫原 | MCM5第1至50位氨基酸
亞型 | IgG
標(biāo)記物 | 未偶聯(lián)
純度 | 抗原親和純化
抗原種屬 | 人
濃度 | 1000 µg/ml(1 mg/ml)
儲(chǔ)存 | 2 8 °C
有效期 | 自收貨之日起1年
緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液,pH 7-8,含0.09%疊d化鈉
儲(chǔ)存與穩(wěn)定性
儲(chǔ)存溫度:2 8 °C
有效期:1年
緩沖體系:Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液(pH 7-8),含0.09%疊d化鈉
疊d化鈉作為防腐劑存在。在使用HRP標(biāo)記二抗進(jìn)行檢測(cè)時(shí),需注意疊d化鈉對(duì)過(guò)氧化物酶的抑制作用。如需進(jìn)行細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)或功能性研究,建議通過(guò)透析或超濾去除疊d化鈉。
推薦應(yīng)用與稀釋度
以下為經(jīng)過(guò)驗(yàn)證或推薦的應(yīng)用條件:
應(yīng)用類型 | 推薦稀釋度/用量 | 關(guān)鍵條件
免疫組織化學(xué)(IHC) | 1:500 1:2,000 | 推薦使用檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0進(jìn)行抗原修復(fù)(FFPE切片)
免疫沉淀(IP) | 6 µg/mg裂解物 | 可高效下拉MCM2-7復(fù)合物
蛋白質(zhì)印跡(WB) | 1:5,000 1:20,000 | 5% Milk-TBST封閉和稀釋,一抗孵育過(guò)夜
MCM5生物學(xué)背景與應(yīng)用價(jià)值
MCM5在DNA復(fù)制中的核心功能
MCM2-7復(fù)合物是復(fù)制許可系統(tǒng)的核心組件,在G1期被加載到染色質(zhì)上,形成復(fù)制前復(fù)合物(pre-RC)。進(jìn)入S期后,復(fù)合物被激活,作為解旋酶驅(qū)動(dòng)DNA復(fù)制叉前進(jìn)。MCM5在這一過(guò)程中發(fā)揮以下作用:
1. 復(fù)合物組裝:MCM5與MCM3形成亞復(fù)合物,是MCM2-7六聚體組裝的必要步驟
2. 解旋酶活性調(diào)控:MCM5參與調(diào)節(jié)MCM復(fù)合物的ATP酶和解旋酶活性
3. 復(fù)制許可限制:通過(guò)細(xì)胞周期依賴性的染色質(zhì)加載與卸載,確保每個(gè)復(fù)制起點(diǎn)在每個(gè)周期內(nèi)僅啟動(dòng)一次DNA復(fù)制
MCM5的異常表達(dá)與多種病理狀態(tài)相關(guān):
腫瘤標(biāo)志物:MCM5在多種惡性腫瘤(如乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、前列腺癌)中過(guò)表達(dá),與增殖指數(shù)(Ki-67)高度相關(guān),且在某些情況下具有更好的預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值
發(fā)育異常:MCM5基因突變與微頭畸形侏儒癥(MGORS8)相關(guān)
MCM5在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的非復(fù)制功能
近年研究發(fā)現(xiàn),MCM5還具有獨(dú)立于DNA復(fù)制的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能:
STAT1相互作用:MCM5與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)直接相互作用
干擾素應(yīng)答:MCM5對(duì)STAT1靶基因的轉(zhuǎn)錄至關(guān)重要,敲減MCM5會(huì)顯著削弱干擾素γ誘導(dǎo)的基因表達(dá)
提示意義:在非增殖細(xì)胞(如終末分化細(xì)胞或靜止期細(xì)胞)中檢測(cè)到MCM5表達(dá)時(shí),可能反映了其在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用,而非復(fù)制活性
本抗體的研究應(yīng)用場(chǎng)景
研究領(lǐng)域 | 應(yīng)用方式 | 目的
細(xì)胞周期調(diào)控 | WB檢測(cè)細(xì)胞周期同步化樣本中的MCM5表達(dá) | 分析MCM5在G1/S期的表達(dá)和染色質(zhì)加載動(dòng)態(tài)
復(fù)制許可分析 | IP下拉MCM2-7復(fù)合物 | 檢測(cè)不同細(xì)胞周期階段復(fù)合物的組成和修飾狀態(tài)
腫瘤標(biāo)志物驗(yàn)證 | IHC檢測(cè)臨床FFPE組織切片 | 評(píng)估MCM5作為增殖標(biāo)志物的診斷或預(yù)后價(jià)值
干擾素信號(hào)通路 | 共IP檢測(cè)MCM5-STAT1相互作用 | 驗(yàn)證病毒或干擾素處理對(duì)復(fù)合物形成的影響
發(fā)育遺傳學(xué) | IHC/WB檢測(cè)MCM5突變模型 | 研究MCM5在神經(jīng)發(fā)育和侏儒癥中的機(jī)制
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