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產(chǎn)品簡介
小牛骨切片/骨片/破骨細胞培養(yǎng)產(chǎn)品參數(shù)
| 供貨周期 | 一周 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
小牛骨切片/骨片/破骨細胞培養(yǎng)詳細信息
破骨細胞培養(yǎng)操作方法
1. 使用raw細胞：
（1） 先消化，按96孔板 每孔5000-10000（具體的密度要自己摸）鋪板。
（2）第二天開始誘導，用10%血清α-men 50ng/ml的rankl誘導，直至出破骨。Raw比較難。
2. 使用原代細胞：
小鼠后肢股骨脛骨的骨髓沖出細胞打散，用10%FBS的α-men （20ng/ml mcsf）養(yǎng)5天，第三天的時候換液。5天后鋪板。
按96孔板每孔8000-10000鋪板，第二天開始誘導，用10%血清α-men 20ng/ml的mcsf 50ng/ml的rankl 誘導。原代多個mcsf 并且要多養(yǎng)5天的原代。
破骨細胞培養(yǎng)問答：
Q1: 我想用小鼠的骨髓來源的巨噬細胞做實驗，但是巨噬細胞很難消化，這個問題怎么解決？
A1: PBS沖洗，加胰酶消化（8分鐘左右，觀察后再決定是否需要更久）；加培養(yǎng)基中和，用移液槍反復吹，使細胞脫板，離心，培養(yǎng)基重懸，然后鋪板加rankl誘導。
Q2：破骨細胞誘導分化的過程中，加入了m-csf和rankel，需要養(yǎng)多久？中間需要換液嗎，換液的頻率是什么樣的？
A2：培養(yǎng)基2天一換，一般4天出細胞，不行再養(yǎng)6-8天。細胞密度要控制好，96孔板8000－10000，六孔板20萬，其他孔板按照這個密度來算就行了。
Q3：骨吸收觀察方法有哪些：
A3： （1）甲苯胺藍（2）電鏡評估，（3）破骨細胞f-actin ring免疫熒光。
電鏡的話不用甲苯胺藍，直接細胞洗掉去拍就行了。 熒光普通的方法染，用actin 抗體 ，細胞膜就染上了
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