在固有免疫與適應(yīng)性免疫調(diào)控、腫瘤免疫逃逸機(jī)制解析、新型疫苗研發(fā)及自身免疫性疾病、移植免疫相關(guān)研究中，樹突狀細(xì)胞（Dendritic Cells, DCs）作為機(jī)體功能最-完備的專職抗原呈遞細(xì)胞（Antigen-Presenting Cells, APCs），是介導(dǎo)免疫啟動(dòng)、免疫活化與免疫耐受平衡的核心樞紐。依托經(jīng)典細(xì)胞因子誘導(dǎo)分化（Cytokine-induced Differentiation）體系實(shí)現(xiàn)的體外DC誘導(dǎo)分化（In vitro DC differentiation），是闡明免疫穩(wěn)態(tài)調(diào)控機(jī)制、構(gòu)建體外免疫疾病模型、開展DC疫苗研發(fā)與細(xì)胞免疫治療的核心技術(shù)基礎(chǔ)，也是當(dāng)前再生醫(yī)學(xué)與腫瘤免疫精準(zhǔn)干預(yù)領(lǐng)域的前沿研究熱點(diǎn)。IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，深耕藥物前端試劑研發(fā)，為廣大科研工作者提供一站式體外DC誘導(dǎo)分化解決方案，有效解決傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)分化低效、功能缺陷、批次不穩(wěn)等核心問題，全-方位助力免疫前沿研究與臨床轉(zhuǎn)化突破。

01    CD14+單核細(xì)胞介紹

CD14+單核細(xì)胞（CD14+ Monocytes）是人體骨髓、外周血來源的經(jīng)典高可塑性髓系祖細(xì)胞，也是體外髓系免疫細(xì)胞定向分化的核心種子細(xì)胞。區(qū)別于終末分化的免疫細(xì)胞，原代單核細(xì)胞（Primary CD14+ Monocytes）具備極-強(qiáng)的譜系分化可塑性，可在不同細(xì)胞因子微環(huán)境誘導(dǎo)下，定向分化為兩種科研、臨床應(yīng)用最-廣泛的功能細(xì)胞：樹突狀細(xì)胞（Dendritic Cells, DCs）與巨噬細(xì)胞（Macrophages）。其細(xì)胞純度、活性及表型穩(wěn)態(tài)，直接決定兩類細(xì)胞的分化效率、表型成熟度與免疫功能完整性，是髓系免疫細(xì)胞體外建模的核心質(zhì)控基礎(chǔ)。

作為多功能髓系前體細(xì)胞，CD14+ Monocytes不會(huì)向淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞等譜系分化，僅特異性定向分化為髓系抗原呈遞細(xì)胞與吞噬功能細(xì)胞，是免疫炎癥機(jī)制、腫瘤免疫、組織修復(fù)研究的核心工具細(xì)胞，其核心生物學(xué)作用貫穿分化、成熟、功能調(diào)控全過程。

CD14+ Monocytes的分化命運(yùn)完-全依賴體外細(xì)胞因子誘導(dǎo)微環(huán)境，不同細(xì)胞因子組合可精準(zhǔn)啟動(dòng)不同譜系分化程序，形成功能、形態(tài)、表型完-全差異化的成熟細(xì)胞，也是目前體外標(biāo)準(zhǔn)化制備mo-DCs、mo-Macrophages的經(jīng)典技術(shù)體系。

02    樹突狀細(xì)胞（DCs）的重要性

樹突狀細(xì)胞(dendritic cell, DC)，是由美國科學(xué)家Steinman 和Cohn 1973年在小鼠脾臟中發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞，因其細(xì)胞膜伸出許多類似于神經(jīng)細(xì)胞的樹突故而得名。根據(jù)其來源、表型及分泌的細(xì)胞因子不同，DC可分為髓系DC和淋巴系DC兩類。兩類DC均起源于體內(nèi)的多能造血干細(xì)胞，但它們各自的前體細(xì)胞不同。髓系DC的前體是外周血中的單核細(xì)胞，與單核細(xì)胞及粒細(xì)胞有共同祖先；而淋巴系DC的前體是漿細(xì)胞樣干細(xì)胞，與T細(xì)胞、NK細(xì)胞有共同祖先。樹突狀細(xì)胞是目前所知的功能最-強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞，它能高效地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原，未成熟DC（immature Dendritic Cells, iDCs）具有較強(qiáng)的遷移能力，可表達(dá)MHCⅠ/Ⅱ類分子、 IgGFc 受體（FcγR）、C3b 受體(C3bR)和某些Toll 樣受體如TLR2、TLR4 及TLR9。未成熟DC 攝取、加工處理抗原能力強(qiáng)，而提呈抗原激發(fā)免疫應(yīng)答能力弱；成熟DC（mature Dendritic Cells, mDCs）表面特征性標(biāo)志為CD1a、CD11c 和CD83，可高表達(dá)MHC-Ⅱ/Ⅰ類分子和共刺激分子（如B7 和ICAM），其攝取、加工處理抗原能力弱，而提呈抗原、啟動(dòng)免疫應(yīng)答能力強(qiáng)。

因此，當(dāng)實(shí)驗(yàn)核心圍繞抗原呈遞、特異性免疫激活、適應(yīng)性免疫應(yīng)答展開時(shí)，必須選擇GM-CSF/IL-4誘導(dǎo)的DC分化體系。DCs作為唯-一可激活初始T細(xì)胞的專職抗原呈遞細(xì)胞（Antigen-Presenting Cells, APCs），核心價(jià)值是搭建固有免疫與適應(yīng)性免疫的橋梁，適用于需要研究“抗原識(shí)別-信號(hào)呈遞-T細(xì)胞活化”完整通路的實(shí)驗(yàn)，是DC疫苗、腫瘤特異性免疫、移植免疫、自身免疫病免疫激活機(jī)制研究的唯-一適配模型，具備不可替代的科研與臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值。

①　雙向調(diào)控免疫應(yīng)答，維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)

未成熟DC細(xì)胞（immature Dendritic Cells, iDCs）主要定位于外周組織，以高效識(shí)別、攝取、加工外源性抗原與內(nèi)源性異?？乖瓰楹诵墓δ?；當(dāng)受到病原體相關(guān)分子模式、炎癥因子等刺激后，可快速啟動(dòng)成熟程序，高表達(dá)MHC-I、MHC-II類分子及CD80、CD86、CD40等共刺激分子與黏附分子，將抗原肽-MHC復(fù)合物呈遞至T細(xì)胞受體，有效激活CD4+、CD8+T細(xì)胞，啟動(dòng)特異性體液免疫與細(xì)胞免疫應(yīng)答，完成高效免疫激活。同時(shí)，DC細(xì)胞可通過調(diào)控Treg細(xì)胞分化參與免疫耐受構(gòu)建，動(dòng)態(tài)平衡機(jī)體免疫活化與免疫抑制狀態(tài)，維持免疫穩(wěn)態(tài)。

②　支撐多領(lǐng)域前沿免疫研究

DC細(xì)胞是免疫機(jī)制研究的核心工具細(xì)胞，依托成熟的DC細(xì)胞誘導(dǎo)分化體外（In vitro DC differentiation）模型，可廣泛應(yīng)用于腫瘤免疫逃逸機(jī)制解析、新型抗感染疫苗研發(fā)、CAR-T細(xì)胞聯(lián)合免疫治療、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫病發(fā)病機(jī)制研究，以及器官-移植免疫排斥調(diào)控等前沿領(lǐng)域，是解析免疫激活、免疫紊亂、免疫耐受分子機(jī)制的核心體外研究載體。

③　臨床細(xì)胞治療與DC疫苗核心載體

在臨床轉(zhuǎn)化領(lǐng)域，DC細(xì)胞是腫瘤個(gè)體化免疫治療的核心載體，DC疫苗已成為實(shí)體腫瘤與血液腫瘤輔助治療的重要研究方向。通過體外標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞因子誘導(dǎo)實(shí)現(xiàn)單核細(xì)胞向功能性DC的定向分化，結(jié)合抗原負(fù)載、功能成熟修飾制備的特異性DC疫苗，可精準(zhǔn)遞呈腫瘤抗原，激活機(jī)體系統(tǒng)性抗腫瘤免疫應(yīng)答，在肺癌、肝癌、淋巴瘤等惡性腫瘤的免疫治療中展現(xiàn)出優(yōu)異的臨床轉(zhuǎn)化潛力。

03    IPHASE CD14單核細(xì)胞DC細(xì)胞誘導(dǎo)分化方案

基于DC細(xì)胞不可替代的科研與臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，依托多年原代免疫細(xì)胞研發(fā)與體外誘導(dǎo)體系優(yōu)化經(jīng)驗(yàn)，構(gòu)建了標(biāo)準(zhǔn)化、高穩(wěn)定性、高可復(fù)刻性的CD14單核細(xì)胞定向誘導(dǎo)DC細(xì)胞技術(shù)體系。該體系基于經(jīng)典GM-CSF/IL-4細(xì)胞因子誘導(dǎo)通路優(yōu)化配比，規(guī)避傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)分化不均、成熟度不足、批次差異大等痛點(diǎn)，可穩(wěn)定實(shí)現(xiàn)原代單核細(xì)胞向成熟功能性DC的高效分化，適配基礎(chǔ)免疫機(jī)制研究、腫瘤免疫藥物篩選、DC疫苗研發(fā)及細(xì)胞治療研發(fā)等多場景科研需求。

IPHASE技術(shù)人員以5000萬凍存人PBMC為分選起點(diǎn)，搭配IPHASE免疫細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)基（Cat NO. 072008.12）進(jìn)行復(fù)蘇，活率95%，后經(jīng)過人單核細(xì)胞陰選試劑盒（Cat NO. 071A205.11）分選CD14+單核細(xì)胞，最終分得人CD14+單核細(xì)胞400萬，且純度為90%，然后將細(xì)胞以50萬/mL接種在T25培養(yǎng)瓶中進(jìn)行誘導(dǎo)準(zhǔn)備。準(zhǔn)備好的人CD14+單核細(xì)胞，搭配IPHASE人DC細(xì)胞誘導(dǎo)分化試劑盒（Cat NO. 075003.11）進(jìn)行體外DC誘導(dǎo)分化培養(yǎng)試驗(yàn)，期間每2天更換一次分化培養(yǎng)基。培養(yǎng)至第7天觀察到細(xì)胞出現(xiàn)”半貼壁、海膽狀“，此時(shí)即為未成熟樹突狀細(xì)胞（immature Dendritic Cells, iDCs）；隨后IPHASE技術(shù)人員進(jìn)一步添加1EU/mL LPS 以進(jìn)行成熟誘導(dǎo)，3天后觀察到細(xì)胞恢復(fù)成”懸浮、展翅狀“，說明IPHASE技術(shù)人員成功收獲成熟樹突狀細(xì)胞（mature Dendritic Cells, mDCs）。

此外，IPHASE技術(shù)人員進(jìn)一步以PBMC為對(duì)照，輔以不同marker進(jìn)行標(biāo)記，流式檢測證明了IPHASE iDC細(xì)胞誘導(dǎo)分化成功！

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