
非重要污染細胞建議直接高壓滅活丟棄,稀缺建系細胞、貴重保藏細胞,可選用以下 7 種成熟支原體去除方案。
步驟:細胞營養(yǎng)馴化→篩選健康細胞群落→反復(fù)平衡鹽洗滌 + 低速離心,依靠浮力與重量差減少支原體數(shù)量;搭配大環(huán)內(nèi)酯、四環(huán)素、喹諾酮三類特-效藥(支原體無細胞壁,青霉素、萬古霉素完-全無效),大幅提升除菌效率。
使用 MRA(Mycoplasma Removal Agent)終濃度 25μg/mL 全周期培養(yǎng),連續(xù)處理 14 天,常規(guī)可徹-底清除細胞內(nèi)支原體,是商業(yè)化常用藥劑方案。
先用除菌藥物預(yù)處理細胞,41℃恒溫培養(yǎng)箱放置 18h,高溫殺滅殘留支原體;注意:高溫會輕微損傷部分敏感細胞,處理后需逐步恢復(fù)培養(yǎng)條件。
每 2~3 天更換新鮮除菌培養(yǎng)基,換液用無菌 PBS 沖洗細胞 1~2 次;細胞密度過高及時分瓶換皿,連續(xù)處理 15 天,結(jié)束后 PCR 復(fù)檢,殘留支原體可追加 6 天處理周期。
添加 5% 兔抗支原體特異性血清,依靠抗體抑制支原體增殖,11 天轉(zhuǎn)陰,轉(zhuǎn)陰后細胞連續(xù)培養(yǎng) 5 個月無復(fù)發(fā),穩(wěn)定性優(yōu)異。
受污染腫瘤細胞接種同種動物皮下 / 腹腔,依托動物自身免疫系統(tǒng)清除支原體,腫瘤細胞在體內(nèi)正常增殖,一段時間后取出細胞體外復(fù)蘇培養(yǎng)。
提取動物腹腔巨噬細胞并純化,和污染細胞共培養(yǎng),巨噬細胞自然吞噬清除支原體,后續(xù)通過染色鏡檢確認(rèn)除菌效果。
常規(guī)珍貴貼壁細胞優(yōu)先 MRA + 培養(yǎng)基輪換方案,腫瘤細胞可選體內(nèi)接種法,按需搭配抗生素純化,處理完成必須復(fù)檢支原體。
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