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試劑詳情

英文名稱： BODIPY 493/503

中文名稱： 氟化硼二吡咯 493/503

CAS： 121207-31-6（主成分參考）

分子式： 核心為吡咯-硼二氟化物骨架結(jié)構(gòu)，具體支鏈取代基因批次而異

分子量： 約 280–320 g/mol（依賴具體取代基）

溶于二甲基亞砜（DMSO）、二甲基甲酰胺（DMF）、二氯甲烷（DCM）等有機(jī)溶劑；微溶于水，需經(jīng)助溶處理方可配制水性工作液。

規(guī)格： 1 mg、5 mg、10 mg（可按需定制包裝）

純度： 95%+（HPLC檢測）

儲存條件： 密封干燥，避光保存，溫度不超過 -20℃。長期存放建議充氮處理。

注意事項(xiàng)： 試劑對光敏感，現(xiàn)配現(xiàn)用，避免反復(fù)凍融解凍。操作時需佩戴丁腈手套，避免接觸皮膚及黏膜。

分子構(gòu)成與結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

1. 核心骨架：BODIPY 493/503 以二吡咯甲川（dipyrromethene）為配體，中心與二氟化硼（BF?）絡(luò)合，形成剛性共軛平面結(jié)構(gòu)。該結(jié)構(gòu)賦予染料較高的摩爾消光系數(shù)（ε > 80,000 M?1cm?1）和窄帶發(fā)射光譜。

2. 光譜特征：吸收峰位于約 493 nm，發(fā)射峰位于約 503 nm，Stokes 位移較?。s 10 nm），適用于雙熒光標(biāo)記體系中的綠色通道。量子產(chǎn)率通常在 0.6–0.9 之間，光穩(wěn)定性優(yōu)于傳統(tǒng)熒光素（FITC）。

3. 取代基調(diào)控：通過修飾吡咯環(huán)上的取代基（如甲基、乙基），可調(diào)節(jié)脂溶性和反應(yīng)活性。標(biāo)準(zhǔn)型 BODIPY 493/503 不含活性基團(tuán)，適合作為中性脂滴探針；若引入 NHS 酯或馬來酰亞胺基團(tuán)，則可用于蛋白質(zhì)或抗體的共價標(biāo)記。

主要應(yīng)用領(lǐng)域

1. 脂滴熒光標(biāo)記：BODIPY 493/503 對中性脂質(zhì)（甘油三酯、膽固醇酯）具有高親和力，能夠穿透細(xì)胞膜并特異性富集于脂滴內(nèi)部。在 confocal 成像中，使用 488 nm 激光激發(fā)，發(fā)射光通過 505–530 nm 濾光片采集，可清晰顯示脂滴大小、數(shù)目及分布。推薦工作濃度為 0.5–2 μM，孵育時間 15–30 分鐘。

2. 活細(xì)胞與固定細(xì)胞雙用：該染料可兼容甲醛或多聚甲醛固定后染色，亦可直接用于活細(xì)胞動態(tài)監(jiān)測。固定后樣本需用 PBS 充分洗滌以去除背景干擾?；罴?xì)胞染色時，建議在無血清培養(yǎng)基中進(jìn)行，避免血清蛋白結(jié)合導(dǎo)致特異性下降。

3. 流式細(xì)胞術(shù)分析：適用于脂滴相關(guān)代謝通路的定量分析。染色后細(xì)胞經(jīng) 488 nm 激發(fā)，在 FL1 通道（530/30 nm）收集信號。建議同時設(shè)置單染對照和未染色對照，以排除自發(fā)熒光干擾。

4. 多通道共定位實(shí)驗(yàn)：由于 BODIPY 493/503 發(fā)射光譜窄，與紅色熒光蛋白（RFP）、Cy3 等染料重疊度低，適合與線粒體探針（如 MitoTracker Red）或溶酶體探針（如 LysoTracker Red）進(jìn)行共定位分析。

操作規(guī)范與儲存條件

1. 溶液配制：取干燥固體溶解于 DMSO 或 DMF，制備 1–5 mM 儲備液。母液分裝至棕色離心管，每管 5–10 μL，避免反復(fù)凍融。使用前室溫回溫，并超聲助溶（5 秒，功率 30%）。

2. 染色流程優(yōu)化：

細(xì)胞密度建議 70%–80% 融合度，染色前用 PBS 洗滌 2 次。

工作液濃度：試驗(yàn)采用 1 μM，孵育 20 分鐘（37℃BODIPY 493/503，5% CO?）。

若背景過高，可通過降低濃度（至 0.5 μM）或縮短孵育時間（至 10 分鐘）優(yōu)化。

染色結(jié)束后，用預(yù)冷 PBS 洗滌 2 次，每次 5 分鐘，避免染料殘留。

3. 故障排查：

無熒光信號：檢查激光波長是否偏離 488 nm，濾光片設(shè)置是否正確，染料是否降解。

背景過高：降低工作液濃度，增加洗滌次數(shù)，或使用含 0.1% BSA 的 PBS 作為洗滌液。

細(xì)胞毒性（活細(xì)胞染色后形態(tài)改變）：縮短孵育時間至 10 分鐘內(nèi)，或降低 DMSO 終濃度至 0.1% 以下。

4. 儲存要點(diǎn)：固體粉末在 -20℃ 避光干燥條件下可穩(wěn)定保存 12 個月。儲備液（DMSO 體系中）在 -20℃ 下有效期為 3 個月。使用前應(yīng)離心去除可能析出的結(jié)晶，取上清液使用。

有關(guān)試劑

BODIPY FL NHS 酯

BODIPY 493/503 馬來酰亞胺

LipidTox 綠色中性脂滴染料

Nile Red（尼羅紅）

Oil Red O（油紅 O）

注：該試劑僅用于科學(xué)研究，不能用于人體實(shí)驗(yàn)或其他治療型用途。

本文試劑資料由西安凱新生物科技小華編輯整理。