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替米考星快速檢測試劑盒說明書
閱讀：147 發(fā)布時(shí)間：2026-5-27替米考星快速檢測試劑盒使用說明書
【原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物替米考星與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭其抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含替米考星的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出殘留物替米考星的含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.5ppb
檢測時(shí)間： 45min
樣本檢測下限：
組織………………………………0.5ppb
尿液………………………………4ppb
樣本回收率
組織……………………………80±15%
尿液……………………………85±15%
交叉反應(yīng)率：
替米考星 ……………………… 100%
【試劑盒組成】
1、 微量測試孔：每條8孔，一板12條
2、 高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液×1瓶：（1ml/瓶）100ppb
3、 抗體工作液 7 ml …………………………… 綠色帽
4、 酶標(biāo)記物 7 ml …………………………… 紅色帽
5、 底物A液 7ml………………………………棕色帽
6、 底物B液 7ml………………………………黑色帽
7、 終止液 7ml………………………………黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液40 ml ……………………………白色帽
9、 2X濃縮復(fù)溶液 50 ml …………………………… 藍(lán)色帽
【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、
振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl
（2）試劑（高檢測限處理方法時(shí)使用）：乙腈、正己烷、氯化鈉
【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】
配液1、1×復(fù)溶液：
將2×濃縮復(fù)溶液用去離子水以1：1稀釋（1份2×濃縮復(fù)溶液+1份去離子水），用于樣本提取和稀釋。
配液2、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照 1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
【樣本前處理步驟】
樣本前處理須知
處理任何樣本時(shí)，都必須注意：
（1）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（2）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
（3）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（A）蛋類和組織處理方法
1、 用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；稱取3±0.05g樣本于50ml離心管中，加入1g氯化鈉，再加入6ml乙腈，用振蕩器振蕩5分鐘；4000轉(zhuǎn)/分以上,室溫離心10分鐘；
2、 取上清液2ml至干凈玻璃試管中，于65℃水浴下氮?dú)?/span>/空氣吹干；
3、 加入0.5 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加0.5ml配好的1×復(fù)溶液強(qiáng)烈振蕩混合30s，室溫4000r/min以上離心5min。
4、 取50 µl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：0.5
（C）尿液
1、 稱取50µl清亮尿液與150µl配制好的1X復(fù)溶液混合30s；
2、 取50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：4倍
【酶標(biāo)免疫分析程序】
操作步驟：
1、 從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，置室 溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 配制標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
配制標(biāo)準(zhǔn)品6：濃度為8ppb
取40µl替米考星高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液與460µl的1X樣本提取液混
合均勻。
配制標(biāo)準(zhǔn)品5：濃度為 4ppb
取200µl標(biāo)準(zhǔn)品6與200µl的1X樣本提取液混合均勻。
配制標(biāo)準(zhǔn)品4：濃度為 2ppb
取200µl標(biāo)準(zhǔn)品5與200µl的1X樣本提取液混合均勻。
配制標(biāo)準(zhǔn)液3：濃度為 1ppb
取200µl標(biāo)準(zhǔn)品4與200µl的1X樣本提取液混合均勻。
配制標(biāo)準(zhǔn)品2：濃度為 0.5ppb
取200µl標(biāo)準(zhǔn)品3與200µl的1X樣本提取液混合均勻。
配制標(biāo)準(zhǔn)品1：濃度為 0ppb
直接使用1X樣本提取液作為標(biāo)準(zhǔn)品1即0ppb
4、 編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl /孔，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。
6、 取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡用干凈的槍頭刺破）。
7、 顯色：每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色10min。
8、 測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與替米考星的含量成負(fù)相關(guān)。
1、 粗略判定
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng /ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值0.241，樣本2的吸光度值為0.785，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.890；0.5ppb為1.504；1.ppb為1.034；2ppb為0.580； 4ppb為0.348；8ppb為0.165。則樣本1的濃度范圍是4ppb-8ppb；樣本2的濃度范圍是1.ppb-2ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中替米考星實(shí)際含量。
2、 定量分析
（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即：
百分吸光度值（%） ＝ | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以替米考星濃度（ng /ml）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中替米考星實(shí)際含量。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來電索取）
3、 標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線：
B/B0 (%)
0.5 1 2 4 8
(ppb) [µg/kg]
圖1：替米考星檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
0 0.5 1 2 4 8
(ppb) [µg/kg]
圖2：替米考星檢測試劑盒的精密度
由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出替米考星檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)替米考星濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項(xiàng)】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應(yīng)儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。