產(chǎn)品概述

本品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的山羊源抗SA2（Stromal Antigen 2）多克隆抗體（貨號(hào)：A300-158A），經(jīng)表位特異性親和純化，以未標(biāo)記形式提供。SA2是黏連蛋白復(fù)合物的核心組分，在姐妹染色單體粘連、染色體正確分離及轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本抗體識(shí)別人和小鼠SA2蛋白，適用于免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫印跡檢測(cè)，是細(xì)胞分裂、表觀遺傳調(diào)控及癌癥相關(guān)研究的可靠工具。

基本規(guī)格參數(shù)

參數(shù) 具體信息

靶標(biāo) SA2（Stromal Antigen 2）

反應(yīng)種屬 小鼠、人

應(yīng)用 ICC, WB

宿主 山羊

克隆性 多克隆

形式 全I(xiàn)gG

免疫原 位于第1100-1150氨基酸殘基之間的區(qū)域

自身抗體亞型 IgG

標(biāo)記物 未標(biāo)記

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人

濃度 1000 µg/ml （1 mg/ml）

保存溫度 2 - 8 °C

有效期 自收貨之日起1年

緩沖液 Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮鈉

生產(chǎn)與純化工藝

本抗體的生產(chǎn)采用表位特異性親和純化策略：

1. 免疫原設(shè)計(jì)：針對(duì)人SA2蛋白中第1100至1150位氨基酸之間的區(qū)域（參考序列NP_006594.3）。該區(qū)域位于蛋白質(zhì)C端附近，特異性較高。

2. 免疫程序：使用上述合成肽段對(duì)山羊進(jìn)行免疫，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗血清。

3. 親和純化：將SA2特異的表位肽固定于固相支持介質(zhì)上，通過(guò)親和層析從抗血清中特異性分離目標(biāo)抗體。該策略確保抗體僅識(shí)別目標(biāo)表位，減少非特異性背景。

4. 濃度測(cè)定：依據(jù)比爾定律，1 mg/ml IgG在280 nm波長(zhǎng)下的吸光度（A280）為1.4。本品最終濃度為1 mg/ml（1000 µg/ml）。

表位定位：抗體識(shí)別的表位位于人SA2蛋白的第1100-1150殘基之間（NP_006594.3編號(hào)）。該區(qū)域在小鼠SA2中高度保守，因此抗體可與小鼠源SA2發(fā)生交叉反應(yīng)。

特異性驗(yàn)證

反應(yīng)種屬：人、小鼠

識(shí)別表位：SA2蛋白C端附近區(qū)域（1100-1150 aa）

經(jīng)ELISA和免疫印跡驗(yàn)證的特異性：與人及小鼠SA2特異性結(jié)合

潛在交叉反應(yīng)：由于SA2屬于黏連蛋白復(fù)合物亞基家族，與SA1（STAG1）具有一定同源性。本抗體是否識(shí)別SA1未明確驗(yàn)證，建議在實(shí)驗(yàn)中設(shè)置SA1已知表達(dá)的對(duì)照樣本進(jìn)行評(píng)估。

生物學(xué)背景

SA2（基因符號(hào)：STAG2，GeneID: 10735）是黏連蛋白復(fù)合物的關(guān)鍵亞基之一。黏連蛋白復(fù)合物在細(xì)胞分裂過(guò)程中發(fā)揮以下核心功能：

姐妹染色單體粘連：在有絲分裂和減數(shù)分裂過(guò)程中將復(fù)制后的姐妹染色單體保持在一起。

染色體正確分離：在前期和中期，黏連蛋白必須從姐妹染色單體上解離，使它們能夠在后期向細(xì)胞兩極正常分離。SA2在此過(guò)程中參與調(diào)控黏連蛋白的解離。

轉(zhuǎn)錄調(diào)控：有趣的是，SA2還通過(guò)與NF-κB相互作用表現(xiàn)出轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性，參與基因表達(dá)調(diào)控。

臨床意義：STAG2基因突變?cè)诙喾N癌癥（如膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、尤文肉瘤、膀胱癌等）中高頻出現(xiàn)，提示SA2作為腫瘤抑制因子的潛在角色。本抗體可用于研究SA2在細(xì)胞周期、腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的具體機(jī)制。

應(yīng)用與推薦稀釋比例

以下推薦稀釋比例為起始參考值。需注意，并非所有列出的應(yīng)用均已在本實(shí)驗(yàn)室完成具體驗(yàn)證，建議用戶(hù)根據(jù)樣本類(lèi)型和實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行梯度優(yōu)化。

應(yīng)用 推薦稀釋比例 備注

免疫細(xì)胞化學(xué) 1:500 - 1:2,000

免疫印跡 1:2,000 - 1:10,000 詳見(jiàn)下方標(biāo)準(zhǔn)操作條件

免疫印跡標(biāo)準(zhǔn)操作條件（經(jīng)實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證）：

封閉液和抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過(guò)夜（4°C或室溫）

二抗推薦：使用驢抗山羊IgG（H+L）抗體（貨號(hào)A50-101P）

免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）典型流程：

細(xì)胞經(jīng)固定（如4%多聚甲醛）和透化（如0.1% Triton X-100）后，與一抗（1:500-1:2000）孵育，隨后與熒光標(biāo)記的二抗反應(yīng)。建議同時(shí)進(jìn)行DAPI核染色以輔助定位。SA2主要定位于細(xì)胞核，在有絲分裂期與染色體共定位。

陽(yáng)性對(duì)照建議：

人源細(xì)胞系（如HeLa、293T）或小鼠細(xì)胞系（如NIH/3T3）的全細(xì)胞裂解物

已知SA2高表達(dá)的細(xì)胞（可通過(guò)Western Blot預(yù)驗(yàn)證）

陰性對(duì)照建議：

使用正常山羊IgG替代一抗

使用SA2敲低或敲除細(xì)胞裂解物（如CRISPR/Cas9介導(dǎo)的STAG2敲除細(xì)胞）

使用與保存注意事項(xiàng)

保存條件：請(qǐng)于2-8°C條件下保存，切勿冷凍。反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性失效。在指定條件下，自收貨之日起1年內(nèi)穩(wěn)定有效。

緩沖液成分：本抗體溶于Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8），含0.09%疊氮鈉作為防腐劑。如后續(xù)實(shí)驗(yàn)涉及對(duì)疊氮鈉敏感的酶學(xué)檢測(cè)或細(xì)胞培養(yǎng)，請(qǐng)通過(guò)透析或脫鹽柱去除。

稀釋緩沖液建議：WB使用5%牛奶-TBST；ICC推薦使用含1% BSA和0.1% Triton X-100的PBS，以降低非特異性吸附并促進(jìn)滲透。

分子量信息：人SA2蛋白的理論分子量約為141 kDa（基于Uniprot Q8N3U4）。在還原性SDS-PAGE中，可觀察到約140-150 kDa的條帶。若在預(yù)測(cè)分子量以外位置觀察到額外條帶，可能為降解產(chǎn)物、翻譯后修飾或非特異性條帶。

實(shí)驗(yàn)優(yōu)化提示：

若WB信號(hào)過(guò)強(qiáng)出現(xiàn)非特異性背景，可嘗試降低一抗?jié)舛龋ㄈ?:5000或更高稀釋度）或縮短曝光時(shí)間。

若信號(hào)過(guò)弱，可增加上樣量（推薦30-50 μg總蛋白/泳道）或延長(zhǎng)一抗孵育時(shí)間。

ICC實(shí)驗(yàn)中，若核信號(hào)不明顯，可優(yōu)化固定/透化條件（如使用甲醇固定或降低Triton X-100濃度）。