產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的 G3BP2抗體（貨號A302-040A）是一款針對人源Ras-GTP酶激活蛋白SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白2（G3BP2）的兔多克隆抗體，經(jīng)抗原親和純化，以未偶聯(lián)完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人源G3BP2蛋白，適用于免疫印跡及免疫沉淀檢測，為下游Ras信號通路、RNA代謝、應(yīng)激顆粒組裝及NF-κB核質(zhì)穿梭調(diào)控研究提供高靈敏度工具。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) 詳細信息

靶標 G3BP2（GTP酶激活蛋白SH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白2）

反應(yīng)性 人類

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第275–325位氨基酸區(qū)域

抗體形式 完整IgG

同型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人類

濃度 1000 µg/ml（1 mg/ml）

緩沖液 Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

儲存條件 2–8 °C

保質(zhì)期 到貨后1年

突出優(yōu)勢：抗體濃度為1000 µg/ml，遠超常規(guī)抗體水平。結(jié)合超寬的WB推薦稀釋范圍（1:10,000–1:25,000），單次采購可支持數(shù)千次檢測，大幅降低單位實驗成本。

免疫原與特異性驗證

A302-040A抗體采用固相載體上固定的G3BP2特異性表位進行親和純化。該抗體識別的表位位于人G3BP2蛋白的第275至325位氨基酸之間（參考編號NP_036429.2，GeneID 9908）。免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測定：1 mg/mL IgG在A280波長處的吸光度為1.4。

特異性驗證要點：

免疫原區(qū)域位于蛋白中間區(qū)域（275–325 aa），該區(qū)域在G3BP2與高度同源的家族成員G3BP1之間存在序列差異，有助于實現(xiàn)特異性識別

G3BP2含有RNA識別基序（RRM）和NTF2樣結(jié)構(gòu)域?？贵w經(jīng)抗原親和純化，可有效避免與G3BP1及其他含RRM結(jié)構(gòu)域蛋白的交叉反應(yīng)

建議使用G3BP2敲除細胞裂解液（如CRISPR/Cas9構(gòu)建的G3BP2 KO細胞）作為陰性對照

應(yīng)用方法與推薦工作濃度

免疫印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:10,000 – 1:25,000（極寬范圍）

實驗方案要點：

封閉液及抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST

一抗孵育條件：4°C孵育過夜（推薦）

細胞裂解液檢測：使用山羊抗兔IgG重鏈+輕鏈抗體（貨號A120-101P）作為二抗

免疫沉淀物檢測：使用兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景

> 功能性提示：由于抗體濃度高達1000 µg/ml且親和力高，即使稀釋至1:25,000仍可獲得強信號。對于常規(guī)表達水平的細胞裂解液（如HeLa、HEK293），推薦從1:10,000起始；對于高表達樣本或需極低背景的實驗，可嘗試1:20,000–1:25,000。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細胞裂解物

操作注意事項：

裂解緩沖液推薦使用非變性裂解液（如含150–200 mM NaCl、0.5–1% NP-40的Tris緩沖液，pH 7.4），以維持G3BP2與應(yīng)激顆粒組分及NF-κB復合物的相互作用

裂解液中必須添加蛋白酶抑制劑（PMSF、蛋白酶抑制劑混合物），若研究應(yīng)激顆粒動態(tài)，可添加RNase抑制劑（可選，取決于實驗目標）

抗體與裂解物共孵育：4°C旋轉(zhuǎn)孵育2小時至過夜

使用Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠捕獲免疫復合物

洗脫后建議使用輕鏈特異性二抗進行WB檢測，避免重鏈信號干擾

復合物共沉淀：G3BP2是應(yīng)激顆粒的核心組分，可與G3BP1形成異源二聚體，并與IκBα及NF-κB復合物相互作用。通過IP-G3BP2，可檢測應(yīng)激顆粒相關(guān)蛋白（如G3BP1、TIA1、Caprin1）的共沉淀，或分析NF-κB信號通路的調(diào)控復合物。

別名 G3BP-2; GAP SH3 domain-binding protein 2; 核轉(zhuǎn)運因子2樣結(jié)構(gòu)域蛋白

儲存與穩(wěn)定性指南

儲存溫度：2–8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致蛋白聚集及活性下降。

防腐劑：0.09%疊d化鈉，可抑制微生物生長。若用于某些功能性實驗（如活細胞成像），需透析去除。

緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，確保長期穩(wěn)定性。

有效期：自到貨之日起1年。建議在瓶身標注收到日期，分裝成小份（如10–20 µl）儲存于2–8°C，以減少反復開管帶來的污染及活性損失。

應(yīng)用場景推薦

1. 應(yīng)激顆粒動態(tài)分析：通過IP-WB檢測應(yīng)激條件下G3BP2與核心應(yīng)激顆粒蛋白（G3BP1、TIA1、Caprin1）的共沉淀變化，驗證應(yīng)激顆粒組裝完整性和藥物干預效果。

2. Ras信號通路研究：在Ras突變的腫瘤細胞系中，敲低G3BP2后通過WB檢測下游效應(yīng)分子（如p-ERK）的變化，評估G3BP2在Ras驅(qū)動的增殖中的作用。

3. NF-κB核質(zhì)穿梭機制：使用IP檢測G3BP2與IκBα/NF-κB復合物的結(jié)合，結(jié)合細胞分級分離實驗分析TNF-α刺激后NF-κB p65的核定位變化。

4. 病毒感染模型：在病毒（如SARS-CoV-2、流感病毒）感染的細胞中，通過WB檢測G3BP2的表達水平及應(yīng)激顆粒形成，研究病毒逃逸宿主RNA granule通路的機制。