產(chǎn)品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的INT11抗體（貨號A301-274A）是一款針對人源整合子復合物亞基11（INT11）的兔多克隆抗體，經(jīng)抗原親和純化，以未偶聯(lián)完整IgG形式提供。該抗體可識別小鼠及人類樣本中的INT11蛋白，適用于免疫印跡、免疫沉淀及免疫組織化學檢測，為RNA聚合酶II介導的snRNA 3′端加工研究提供高效工具。

核心規(guī)格參數(shù)

參數(shù) 詳細信息

靶標 INT11（整合子復合物亞基11）

反應性 小鼠、人類

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第550位氨基酸至C端區(qū)域

抗體形式 完整IgG

同型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人類

濃度 1000 µg/ml（1 mg/ml）

緩沖液 Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊d化鈉

儲存條件 2–8 °C

保質(zhì)期 到貨后1年

突出優(yōu)勢：該抗體濃度為1000 µg/ml，顯著高于常規(guī)抗體，每微升可提供1 µg活性抗體，適合高通量或高靈敏度實驗。

免疫原與特異性驗證

A301-274A抗體采用固相載體上固定的INT11特異性表位進行親和純化。該抗體識別的表位位于人INT11蛋白的第550至600位氨基酸之間（參考編號NP_060341.2，GeneID 54973）。免疫球蛋白濃度依據(jù)比爾定律測定：1 mg/mL IgG在A280波長處的吸光度為1.4。

特異性驗證要點：

免疫原區(qū)域位于蛋白C端（550–600 aa），該區(qū)域在INT11同源物中具有保守性，支持小鼠與人樣本的交叉檢測

INT11屬于β-內(nèi)酰胺酶家族，與CPSF-73和CPSF-100具有序列相似性。抗體經(jīng)抗原親和純化，可有效避免與家族內(nèi)其他成員的交叉反應

建議使用INT11敲低或敲除細胞裂解液作為陰性對照

應用方法與推薦工作濃度

免疫印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:2,000 – 1:10,000

實驗方案要點：

封閉液及抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST

一抗孵育條件：4°C孵育過夜（推薦）

細胞裂解液檢測：使用山羊抗兔IgG重鏈+輕鏈抗體（貨號A120-101P）作為二抗

免疫沉淀物檢測：使用兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景

> 功能性提示：由于抗體濃度高達1000 µg/ml，即使稀釋到1:10,000仍可獲得0.1 µg/ml的工作濃度。對于高表達樣本（如HEK293、HeLa），可嘗試更高稀釋倍數(shù)以節(jié)省抗體。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細胞裂解物

操作注意事項：

裂解緩沖液推薦使用溫和非變性裂解液（如含0.5% NP-40的Tris緩沖液，150 mM NaCl），以保留整合子復合物十二個亞基的天然相互作用

裂解液中必須添加蛋白酶抑制劑（PMSF、蛋白酶抑制劑混合物）

抗體與裂解物共孵育：4°C旋轉(zhuǎn)孵育2小時至過夜

使用Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠捕獲免疫復合物

洗脫后建議使用輕鏈特異性二抗進行WB檢測，避免重鏈信號干擾

復合物共沉淀：INT11是整合子復合物的核心亞基之一，其IP產(chǎn)物可進一步檢測其他亞基（如INTS1、INTS5、INTS9等），以驗證復合物完整性。

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋范圍：1:1,000 – 1:5,000（極寬范圍，覆蓋低至高表達組織）

抗原修復條件：

對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復

可嘗試pH 9.0 Tris-EDTA，但根據(jù)產(chǎn)品信息，pH 6.0檸檬酸鹽為s選方案

染色步驟建議：

1. 脫蠟、水合后，用3% H?O?封閉內(nèi)源過氧化物酶

2. 微波或高壓鍋加熱至沸騰，維持10–20分鐘進行抗原修復

3. 室溫冷卻20–30分鐘，正常血清封閉30分鐘

4. 一抗4°C孵育過夜（推薦1:2000起始稀釋）

5. HRP標記二抗及DAB顯色，蘇木精復染

組織表達譜：INT11在多種人類和小鼠組織中廣泛表達，尤其在睪丸、腦、胸腺中水平較高。

靶點生物學背景：INT11

INT11（整合子復合物亞基11），也稱為CPSF3L或RC68，是整合子復合物的12個亞基之一。該復合物在RNA聚合酶II介導的小核RNA（snRNA）3′端加工中發(fā)揮關鍵作用。

核心功能：

1. snRNA 3′端加工：整合子復合物負責U1和U2 snRNA的3′端形成。snRNA是剪接體的核心組分，其正確的3′端成熟對于剪接體組裝和pre-mRNA剪接至關重要。INT11作為復合物的催化亞基之一，參與RNA切割反應。

2. β-內(nèi)酰胺酶家族成員：INT11具有與切割和多聚腺苷酸化特異性因子CPSF-73和CPSF-100相似的序列。CPSF-73是mRNA 3′端加工的關鍵核酸內(nèi)切酶，INT11可能在snRNA加工中發(fā)揮類似的催化功能。

3. 轉(zhuǎn)錄調(diào)控關聯(lián)：整合子復合物與RNA聚合酶II的C端結構域（CTD）相互作用，共轉(zhuǎn)錄完成snRNA的成熟。INT11的功能異?？赡苡绊憇nRNA水平，進而干擾全球剪接過程。

分子特征：

分子量：約68 kDa（與別名RC68中的68 kDa一致）

結構域：包含β-內(nèi)酰胺酶結構域，負責核酸內(nèi)切酶活性

相互作用：與整合子復合物其他亞基（INTS1-INTS10、INTS12）形成穩(wěn)定的多蛋白復合物

臨床關聯(lián)：

INT11基因突變或表達異常與某些神經(jīng)發(fā)育疾病及癌癥相關，但具體機制仍在研究中。由于snRNA對神經(jīng)元功能的重要作用，整合子復合物缺陷可能與神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關。

儲存與穩(wěn)定性指南

儲存溫度：2–8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致蛋白聚集及活性下降。

防腐劑：0.09%疊d化鈉，可抑制微生物生長。若用于活細胞實驗，需透析去除。

緩沖體系：Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，提供穩(wěn)定的pH環(huán)境。

有效期：自到貨之日起1年。建議在瓶身標注收到日期，避免超期使用。