抗體捕獲分泌細(xì)胞因子斑點(diǎn)是ELISPOT技術(shù)的核心原理和關(guān)鍵步驟。在ELISPOT實(shí)驗(yàn)中,微孔板底部預(yù)包被了針對(duì)特定細(xì)胞因子的特異性捕獲抗體,這些抗體能夠高效、特異性地結(jié)合細(xì)胞分泌的目標(biāo)細(xì)胞因子,在分泌細(xì)胞周圍形成局部高濃度的“印跡”。biosys bioreader酶聯(lián)斑點(diǎn)分析儀通過(guò)對(duì)這些抗體捕獲形成的斑點(diǎn)進(jìn)行高精度成像和定量分析,實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的精確定量,這一技術(shù)流程構(gòu)成了ELISPOT實(shí)驗(yàn)的完整檢測(cè)鏈條。
抗體捕獲分泌細(xì)胞因子斑點(diǎn)的形成過(guò)程是一個(gè)精密的生物學(xué)和化學(xué)過(guò)程,涉及多個(gè)關(guān)鍵步驟的協(xié)調(diào)配合。首先,微孔板底部預(yù)先包被了高純度的特異性捕獲抗體,這些抗體通過(guò)物理吸附或化學(xué)偶聯(lián)的方式牢固地結(jié)合在板底表面。隨后,細(xì)胞被加入孔中并在適當(dāng)?shù)拇碳l件下培養(yǎng),受到抗原刺激的細(xì)胞開始分泌目標(biāo)細(xì)胞因子。這些細(xì)胞因子剛剛從細(xì)胞中釋放出來(lái),便立即被板底臨近的捕獲抗體結(jié)合,形成“捕獲抗體-細(xì)胞因子”復(fù)合物。這一即時(shí)捕獲機(jī)制確保了細(xì)胞因子在其分泌源附近被固定,形成了與分泌細(xì)胞位置對(duì)應(yīng)的局部高濃度區(qū)域。
在檢測(cè)階段,加入生物su標(biāo)記的檢測(cè)抗體,與捕獲的細(xì)胞因子結(jié)合,形成“捕獲抗體-細(xì)胞因子-檢測(cè)抗體”的三明治復(fù)合物。隨后加入酶標(biāo)記的鏈霉親和素,與生物su結(jié)合,最后加入顯色底物,在酶的作用下產(chǎn)生不溶性的有色沉淀,在每個(gè)分泌細(xì)胞的位置形成一個(gè)可視化的斑點(diǎn)。這個(gè)斑點(diǎn)一旦形成便無(wú)法擴(kuò)散,因此每個(gè)斑點(diǎn)代表了最初的一個(gè)特異性細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)了對(duì)功能性細(xì)胞的直接計(jì)數(shù)。BIOREADER®設(shè)備正是通過(guò)對(duì)這些斑點(diǎn)的自動(dòng)識(shí)別和計(jì)數(shù),實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的精確定量。
BIOREADER®設(shè)備在抗體捕獲斑點(diǎn)的檢測(cè)方面具有突出的性能優(yōu)勢(shì)。設(shè)備的立體3D雙遠(yuǎn)心照明系統(tǒng)能夠從三個(gè)維度均勻照射微孔板底部,使抗體捕獲形成的斑點(diǎn)呈現(xiàn)出清晰的形態(tài)和均勻的染色特征。高分辨率科學(xué)級(jí)相機(jī)能夠捕捉到微小的斑點(diǎn)信號(hào),確保不遺漏任何陽(yáng)性細(xì)胞。設(shè)備還支持雙色和熒光多色檢測(cè),能夠同時(shí)分析多種不同細(xì)胞因子的分泌情況。
在數(shù)據(jù)分析方面,BIOREADER®設(shè)備能夠?qū)Σ煌螒B(tài)特征的斑點(diǎn)進(jìn)行分類分析。例如,系統(tǒng)可以根據(jù)斑點(diǎn)的大小分為小斑點(diǎn)、中斑點(diǎn)和大斑點(diǎn),這反映了細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的強(qiáng)度差異;系統(tǒng)可以根據(jù)斑點(diǎn)的光密度分為弱陽(yáng)性、陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性,這反映了細(xì)胞活化程度的不同。這些分類統(tǒng)計(jì)信息對(duì)于深入研究免疫應(yīng)答的異質(zhì)性和細(xì)胞功能狀態(tài)具有重要價(jià)值。
抗體捕獲分泌細(xì)胞因子斑點(diǎn)技術(shù)廣泛應(yīng)用于疫苗研發(fā)中的免疫原性評(píng)價(jià)、腫瘤免疫zhi療監(jiān)測(cè)和感染性疾病診斷等領(lǐng)域。
代表性產(chǎn)品型號(hào): BIOREADER® 7000-E、BIOREADER® 7000-F、BIOREADER® 6000

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