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基因編輯用酶的定制開發(fā)/Cas核酸酶
- 公司名稱 廣州艾迪基因科技有限責(zé)任公司
- 品牌 艾迪基因
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/12/13 11:09:05
- 訪問(wèn)次數(shù) 151
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| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 1、基因編輯 2、CRISPR檢測(cè)6/管) |
|---|---|
| 周期 | 快至1周 |
| 價(jià)格 | 3800元起 ； |
| Spcas9 | Lbcas12a | Aapcas12b | Lbucas13a | Lwacas13a | |
|---|---|---|---|---|---|
| PAM/PFS | 5’-NGG-3’ | 5’-TTTV-3’ | 5’-TTN-3’ | None | None |
| None | dsDNA | dsDNA or ssDNA | dsDNA or ssDNA | ssRNA | ssRNA |
| Cis-cleavage | dsDNA | dsDNA or ssDNA | dsDNA or ssDNA | ssRNA | ssRNA |
| Trans-cleavage | None | ssDNA | ssDNA | ssRNA | ssRNA |
SpCas9是一種依賴于sgRNA引導(dǎo)的 DNA內(nèi)切核酸酶。在靶標(biāo)DNA存在PAM（5’-NGG-3’）的情況下，SpCas9 Nuclease能在sgRNA引導(dǎo)下特異性結(jié)合并切割靶標(biāo)dsDNA，使DNA雙鏈斷裂并生成平末端。其切割位點(diǎn)位于目標(biāo)序列target sequence內(nèi)，距離PAM 3個(gè)堿基的位置。SpCas9不僅可用于基因編輯，還可應(yīng)用于體外靶標(biāo) DNA 的切割、目的片段的克隆等實(shí)驗(yàn)。
LbCas12a是一種依賴crRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，在靶標(biāo)雙鏈DNA存在PAM（（5’-TTTV-3’）序列的情況下，LbCas12a能在crRNA介導(dǎo)下特異性識(shí)別并切割雙鏈DNA，而LbCas12a 特異性切割靶標(biāo)單鏈DNA不依賴PAM序列。LbCas12a-crRNA復(fù)合物與互補(bǔ)dsDNA或ssDNA結(jié)合后，其非特異性ssDNA反式切割活性被激活，通過(guò)設(shè)計(jì)兩端標(biāo)記熒光基團(tuán)或其它小分子標(biāo)記的Reporter ssDNA，可實(shí)現(xiàn)Cas12a對(duì)DNA模板的檢測(cè)和信號(hào)放大，可通過(guò)熒光儀和試紙條觀察結(jié)果。
AapCas12b核酸酶是一種依賴 sgRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，在靶標(biāo)雙鏈DNA存在PAM（5’-TTN-3’）序列的情況下，由sgRNA介導(dǎo)特異性識(shí)別并切割雙鏈DNA，而AapCas12b特異性切割靶標(biāo)單鏈DNA則不依賴PAM序列。AapCas12b-crRNA復(fù)合物與互補(bǔ)的dsDNA或者ssDNA結(jié)合后，其非特異性ssDNA反式切割活性被激活。AapCas12b的好的反應(yīng)溫度為60℃，因此適合與環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）聯(lián)用。
LbuCas13a是一種由crRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，對(duì)PAM（PFS）位點(diǎn)無(wú)依賴性。在crRNA識(shí)別并切割靶標(biāo)RNA時(shí)，Lbucas13a的反式切割活性被激活，可非特異切割體系中單鏈 RNA(ssRNA)。通過(guò)設(shè)計(jì)兩端標(biāo)記熒光基團(tuán)或者其他標(biāo)記物的RNA探針，可實(shí)現(xiàn)對(duì)RNA模板的檢測(cè)和信號(hào)放大，可通過(guò)熒光儀或試紙條觀察結(jié)果。
LwaCas13a是一種由crRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，與LbuCas13a一樣，對(duì)PAM（PFS）位點(diǎn)無(wú)依賴性。在crRNA識(shí)別并切割靶標(biāo)RNA時(shí)，Lwacas13a的反式切割活性被激活，可實(shí)現(xiàn)對(duì)體系中的ssRNA的非特異切割。通過(guò)設(shè)計(jì)兩端標(biāo)記熒光基團(tuán)或者其他標(biāo)記物的RNA探針，可實(shí)現(xiàn)CRISPR/Cas13a對(duì)RNA模板的檢測(cè)和信號(hào)放大?？赏ㄟ^(guò)熒光儀或試紙觀察結(jié)果。
通過(guò)活性測(cè)試，對(duì)比艾迪基因提供的基因編輯用酶與競(jìng)品的性能。
反應(yīng)體系中添加待檢Target模板、Cas酶、crRNA和熒光探針，當(dāng)crRNA與Cas酶組裝成功能復(fù)合物并識(shí)別Target模板后，會(huì)激活Cas酶的反式切割活性并切割熒光探針釋放出熒光信號(hào)，通過(guò)熒光值來(lái)反映酶的性能。左圖和右圖是分別針對(duì)Lbucas12a和Lwacas3a兩種酶進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果顯示，艾迪基因提供的酶的熒光強(qiáng)度更強(qiáng)，切割活性與靈敏性明顯更優(yōu)。
Cas12與guide RNA、target DNA結(jié)合后會(huì)被激發(fā)針對(duì)ssDNA的反式剪切活性；Cas13與guide RNA、target RNA結(jié)合后會(huì)被激發(fā)針對(duì)ssRNA的反式剪切活性；而Cas9暫未被報(bào)道反式剪切活性。
①RPA恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒于-20℃保存，可長(zhǎng)期存放。
②靶標(biāo)質(zhì)?？砷L(zhǎng)期存放-20℃ ③ Cas蛋白反復(fù)凍融容易影響活性，建議分裝多管，存放-80℃，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要取出使用。另外，短期內(nèi)使用的，可放-20℃保存。
③crRNA容易降解，建議短時(shí)間內(nèi)用不到的于-80℃保存。
④探針是DNA雙鏈，相對(duì)來(lái)說(shuō)沒有那么容易降解，可放-20℃保存。
該產(chǎn)品被引用文獻(xiàn)
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