ELISA實驗操作要點(diǎn)：樣本收集及保存操作不當(dāng)會影響實驗結(jié)果

　　一、樣本收集不當(dāng)?shù)挠绊?/p>

　　假陽性結(jié)果?：嚴(yán)重溶血時，血紅蛋白自帶過氧化物酶活性，會催化底物非特異性顯色;樣本被細(xì)菌污染，菌體含內(nèi)源性HRP，也會引發(fā)假陽性。

　　假陽性干擾?：血液未全凝固就強(qiáng)行離心，殘留的纖維蛋白原會在孔內(nèi)形成絮狀沉淀，難以洗凈，直接造成假陽性結(jié)果。

　　結(jié)果偏差?：用含EDTA、NaN?的容器收集樣本，會抑制辣根過氧化物酶活性，導(dǎo)致顯色偏弱，出現(xiàn)假陰性。

　　二、樣本保存不當(dāng)?shù)挠绊?/p>

　　目標(biāo)物降解?：樣本反復(fù)凍融、長期在室溫放置，會讓待測蛋白變性失活，濃度大幅降低，最終得到假陰性結(jié)果。

　　非特異性升高?：4℃存放超過5天，血清中IgG會發(fā)生聚合，間接法實驗的本底值明顯升高，干擾結(jié)果判讀。

　　樣本污染變質(zhì)?：未密封存放的樣本易被交叉污染，不同批次樣本間相互干擾，大幅增加實驗隨機(jī)誤差。

　　三、規(guī)范操作要點(diǎn)

　　收集環(huán)節(jié)?：血清用無熱原試管采集，室溫放置2小時待凝固后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離上清，全程避免溶血。

　　保存環(huán)節(jié)?：按單次檢測用量分裝，短期2-8℃存放不超過5天，長期凍存于-20℃/ -80℃，嚴(yán)格杜絕反復(fù)凍融。

　　復(fù)融環(huán)節(jié)?：凍存管凍存樣本在15-25℃水浴快速復(fù)融，混勻后再次離心去除沉淀，再用于后續(xù)檢測。

　　注：以上科研產(chǎn)品資料供參考!

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