真空離心濃縮儀在寡核苷酸合成中的應(yīng)用
真空離心濃縮儀在寡核苷酸合成(Oligo Synthesis)中扮演著至關(guān)重要的角色,是連接“合成”與“純化”的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
寡核苷酸合成(固相亞磷酰胺法)是一個多步循環(huán)過程,每一步都涉及化學試劑的添加、反應(yīng)和洗滌。合成的最終產(chǎn)物通常存在于含高濃度氨水、有機溶劑(如乙腈)或緩沖鹽的溶液中。在進入純化(如HPLC、PAGE、LC-MS)和后續(xù)應(yīng)用(如PCR、基因組裝、藥物遞送研究)之前,必須:
1、去除高濃度氨水
脫保護副產(chǎn)物和溶劑,未除盡的氨水會干擾后續(xù)的純化分離和質(zhì)譜檢測。
2、移除有機溶劑
殘留的乙腈等有機相會影響色譜柱分離效果和質(zhì)譜離子化效率,導(dǎo)致信號抑制或峰形異常。
3、濃縮樣品
合成后的粗品溶液體積通常較大(數(shù)毫升),需濃縮至小體積(微升級)以適應(yīng)純化儀器的上樣量(如HPLC進樣環(huán)體積,通常為50-500 μL)。
傳統(tǒng)方法(如氮氣吹掃、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā))存在處理通量低、易暴沸導(dǎo)致樣品飛濺、或高溫導(dǎo)致長鏈Oligo(>50mer)斷裂降解的缺陷。而真空離心濃縮儀通過結(jié)合 離心力、真空和可控加熱,能很好地解決這些問題。
離心濃縮技術(shù)的優(yōu)勢
真空離心濃縮儀在寡核苷酸合成中的核心優(yōu)勢,在于它能夠以溫和、高效且無交叉污染的方式,完成從粗產(chǎn)物到純化前樣品的關(guān)鍵過渡。它利用真空環(huán)境顯著降低氨水和有機溶劑的沸點,從而在低溫(通常低于40℃)條件下快速蒸發(fā)溶劑,這很好地保護了對熱敏感的寡核苷酸(特別是長鏈和帶有熒光標記的序列)免受降解。同時,其高通量設(shè)計能兼容96孔板或離心管,一次運行即可處理數(shù)十至數(shù)百個樣品,大幅提升了從合成到純化的整體通量。更重要的是,運行過程中離心力確保樣品始終安穩(wěn)地沉積于管底,有效防止了溶劑暴沸引發(fā)的樣品飛濺和交叉污染,為后續(xù)獲得高純度的寡核苷酸產(chǎn)品提供了堅實保障。
1、溫和濃縮
在真空環(huán)境下,氨水和乙腈/水共沸物的沸點大幅降低,可在室溫至40℃的低溫環(huán)境下快速蒸發(fā)溶劑,保護對熱敏感的合成產(chǎn)物(特別是帶有熒光標記或磷酸化修飾的Oligo),防止其降解。
2、高通量處理
適配96孔板或384孔板,可在單次運行中濃縮成百上千個樣品,大幅提升合成與純化的通量。
3、防交叉污染
離心力使樣品始終沉積于管底,溶劑蒸汽被冷阱捕獲,有效防止了暴沸導(dǎo)致的樣品交叉污染。
4、兼容性強
可輕松處理含有機溶劑(乙腈、氨水)和水相的混合溶液。
應(yīng)用流程
在寡核苷酸固相合成與氨水脫保護完成后,首先將含有目標產(chǎn)物、氨水及有機溶劑的粗品溶液轉(zhuǎn)移至真空離心濃縮儀專用的離心管或96孔板中;隨后,設(shè)備在真空環(huán)境下通過溫和加熱(通常低于40℃)快速蒸發(fā)去除體系中的氨水和乙腈等揮發(fā)性溶劑,使樣品濃縮至微升級體積;濃縮后的樣品即可直接用于HPLC或PAGE進行純化分離;最后,將純化后收集的目標產(chǎn)物餾分再次置于濃縮儀中,去除含水流動相,以獲得干燥的寡核苷酸粉末或高濃度溶液,用于后續(xù)定量、質(zhì)檢及下游生物學應(yīng)用。

1、合成與脫保護
合成完成后,用氨水將寡核苷酸從CPG載體上切割下來,同時脫除堿基保護基。
2、初次濃縮
將粗產(chǎn)物溶液置于真空離心濃縮儀中,去除大部分氨水和有機溶劑。
3、純化
濃縮后的樣品即可用于HPLC或PAGE進行純化。
4、二次濃縮
純化后的收集餾分(含目標Oligo的水溶液)再次進行離心濃縮,去除流動相,得到干燥的寡核苷酸粉末或高濃度溶液,用于后續(xù)凍干或直接使用。
富睿捷離心濃縮儀
富睿捷真空離心濃縮設(shè)備可同時處理多個樣品,無需擔心交叉污染。系統(tǒng)內(nèi)程序可設(shè)定至多30個,主機配備樣品在線成像系統(tǒng),可在運行過程中觀察樣品濃縮狀態(tài),并根據(jù)不同的樣品對整機的真空度進行調(diào)節(jié)。設(shè)備采用皮拉尼真空計可實時顯示腔體內(nèi)的真空度,并保證真空度的真實性。根據(jù)不同的樣品可對整機轉(zhuǎn)速進行調(diào)節(jié),配備實驗室智能互聯(lián)及遠程操控系統(tǒng)及智能云端故障排查系統(tǒng),手機app可直接操控機器對主機遠程進行腔體預(yù)熱,溫度和真空度以及轉(zhuǎn)速可實時在app顯示。

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