彗星實(shí)驗(yàn)（Comet assay）又稱單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，是在單細(xì)胞水平檢測(cè)有核細(xì)胞DNA斷裂的技術(shù)。細(xì)胞受到氧化應(yīng)激、輻射、化學(xué)物質(zhì)等損傷因子作用時(shí)，DNA鏈會(huì)發(fā)生斷裂，形成大小不一的片段。在堿性條件下，DNA雙鏈解旋，斷裂的DNA片段從核中釋放出來(lái)，在電場(chǎng)作用下向陽(yáng)極遷移，形成彗星形態(tài)。DNA受損越嚴(yán)重，遷移的DNA量越多，遷移距離越長(zhǎng)。通過(guò)測(cè)定遷移部分的長(zhǎng)度可定量測(cè)定單個(gè)細(xì)胞DNA損傷程度。

    實(shí)驗(yàn)過(guò)程：

1. 準(zhǔn)備細(xì)胞；

2. 第一層凝膠德制備：在載玻片上，1%正常熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠的制備，加蓋玻片，4℃放置大于10min使其凝固；

3. 第二層凝膠的制備：10ul細(xì)胞（104個(gè)）和75ul的0.7%低熔點(diǎn)瓊脂糖混合均勻，滴加到第一層凝膠上，4℃放置大于10min；

4. 在4℃細(xì)胞裂解過(guò)夜；

5. 將載玻片放入水平電泳槽中，倒入4℃預(yù)冷的電泳緩沖液，室溫放置60min；

6. 電泳電壓設(shè)定為20V，時(shí)間20min；

7. 電泳后將載玻片置于平皿內(nèi)，加入中性緩沖液，4℃中和1-3次，每次10min；

8. 在載玻片上滴加20ulPI溶液，避光染色10min ，超純水洗滌3次，蓋上蓋玻片；

9. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果。