恒奧德儀薄層成像掃描儀 成像掃描儀操作流程工作原理
恒奧德儀薄層成像掃描儀 成像掃描儀操作流程工作原理
一、工作原理
薄層掃描儀是針對(duì)薄層板斑點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)的專(zhuān)用分析儀器,依托薄層色譜分離技術(shù)開(kāi)展工作。它利用氘燈、鹵鎢燈等不同光源,輸出特定波長(zhǎng)的單色光照射展開(kāi)后的樣品斑點(diǎn),通過(guò)檢測(cè)斑點(diǎn)對(duì)光的吸收、反射或激發(fā)的熒光信號(hào),經(jīng)光電轉(zhuǎn)換和積分計(jì)算,得到斑點(diǎn)對(duì)應(yīng)的待測(cè)物質(zhì)含量,檢測(cè)精度可控制在3%以?xún)?nèi)。
其核心檢測(cè)方法包含三類(lèi):
吸收法:基于斑點(diǎn)對(duì)特征光的吸收特性定量,需通過(guò)Kubelka-Munk理論校正薄層散射帶來(lái)的吸光度非線性問(wèn)題。
熒光法:檢測(cè)物質(zhì)受激發(fā)產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度,靈敏度比吸收法高1~3個(gè)數(shù)量級(jí)。
熒光猝滅法:通過(guò)非熒光待測(cè)物削弱背景熒光的程度,實(shí)現(xiàn)間接定量。
二、關(guān)鍵技術(shù)機(jī)制
?掃描模式優(yōu)化?
常用雙波長(zhǎng)鋸齒掃描,雙波長(zhǎng)通過(guò)樣品吸收峰和參比波長(zhǎng)交替掃描,消除背景干擾;鋸齒掃描以點(diǎn)狀光源逐點(diǎn)累加采樣,補(bǔ)償薄層厚度不均、斑點(diǎn)形狀不規(guī)則帶來(lái)的誤差,大幅提升檢測(cè)穩(wěn)定性。
?信號(hào)校正處理?
儀器配套軟件可自動(dòng)完成基線校正、曲線校直,將受散射影響的非線性吸光度曲線修正為標(biāo)準(zhǔn)線性曲線,適配外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法等定量方式。
三、操作流程
前期準(zhǔn)備:完成薄層板制備活化、樣品溶液提取純化、點(diǎn)樣、展開(kāi)、顯色定位等前處理步驟。
儀器設(shè)置:開(kāi)機(jī)預(yù)熱,選定掃描模式、檢測(cè)波長(zhǎng),完成基線校準(zhǔn),錄入樣品信息。
掃描檢測(cè):將薄層板平穩(wěn)放入樣品臺(tái),啟動(dòng)掃描,實(shí)時(shí)監(jiān)控信號(hào)狀態(tài)。
數(shù)據(jù)處理:軟件自動(dòng)識(shí)別斑點(diǎn)、計(jì)算Rf值與峰面積,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量分析,導(dǎo)出檢測(cè)報(bào)告。
四、日常操作要點(diǎn)
開(kāi)機(jī)后需充分預(yù)熱避免基線漂移,點(diǎn)樣直徑控制在1~2mm防止峰形拖尾;每月用無(wú)水乙醇擦拭光學(xué)窗口,每季度校準(zhǔn)一次儀器線性度,保障檢測(cè)精度。
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