簡介：雖然認(rèn)為藥物是惰性的，但有研究表明藥物輔料與活性物質(zhì)之間的相互作用仍明顯的影響了藥品的安全和效用，因此人們了解最終藥物劑量中輔料和活性成分（API）之間相互作用的意識不斷加強。主要關(guān)注領(lǐng)域之一是輔料中的雜質(zhì)與藥物分子之間潛在化學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致反應(yīng)物的產(chǎn)生，即使痕量的反應(yīng)雜質(zhì)也能夠引起藥物明顯的穩(wěn)定性問題，因為就重量和摩爾質(zhì)量而言，輔料遠(yuǎn)超過API。痕量的反應(yīng)產(chǎn)物也很容易超過多數(shù)藥品關(guān)于降解產(chǎn)物低于0.2%的要求。輔料中的甲醛能夠與藥品降解產(chǎn)物中的初級和/或二級胺基團形成聚合物。也有報道指出，甲醛能夠?qū)е履z囊凝膠鍵合，從而引起藥物體外分解的不利效果。由于醛類物質(zhì)活性，在藥物的配方設(shè)計過程中，及時評估輔料中醛類物質(zhì)的存在，對避免后續(xù)藥物研發(fā)過程發(fā)生無法預(yù)料的穩(wěn)定性問題至關(guān)重要。

本應(yīng)用文獻(xiàn)建立了輔料中甲醛定量測定方法，為藥物配方的設(shè)計提供了獨特的見解。本文基于PFBHA的衍生，使用靜態(tài)頂空氣相色譜（SHS-GC）電子轟擊（EI）質(zhì)譜聯(lián)用儀，采用全掃描和選擇離子掃描（SIM）同時監(jiān)測。該方法可用于篩查輔料中的甲醛。甲醛是無色具有刺激性氣味的氣體（圖1），具有揮發(fā)性，分子量為30amu，沸點低（(-21 ℃）。由于甲醛的易揮發(fā)性，各種基體樣品中的甲醛可采用頂空方法很容易的測定，且準(zhǔn)確度高。

試驗本應(yīng)用文獻(xiàn)使用PerkinElmer Clarus® 680氣相色譜儀，Clarus質(zhì)譜儀和TurboMatrix™頂空40系統(tǒng)。表1,2,3提供了GC/MS、頂空的儀器操作參數(shù)，儀器的聯(lián)接、數(shù)據(jù)分析和報告由PerkinElmer TurboMatrix™數(shù)據(jù)系統(tǒng)完成。儲備溶液：稱取20mg的甲醛置于100mL的容量瓶中，用瓶裝水定容至刻度，制備200µg/mL的甲醛儲備溶液。溶液A：取5mL的儲備溶液用瓶裝水稀釋至100mL，得到濃度為10µg/mL的溶液。溶液B：5mL的溶液A用瓶裝水稀釋至100mL，得到濃度為0.5µg/mL的溶液。內(nèi)標(biāo)物質(zhì)（I.S.）：稱取50mg環(huán)己酮于50mL的容量瓶中，用瓶裝水稀釋至刻度，得到濃度1000µg/mL的溶液。取10mL的1000µg/mL的環(huán)己酮溶液用瓶裝水稀釋至250mL后，再移取20mL用瓶裝水稀釋至1000mL。該I.S.溶液用于稀釋校準(zhǔn)溶液和制備樣品溶液。PFBHA溶液：100mgPFBHA使用瓶裝水溶解，并且分別移取1mL與頂空瓶中，用于衍生樣品和標(biāo)準(zhǔn)溶液中的甲醛。校準(zhǔn)曲線：改變移取0.5µg/mL甲醛溶液（溶液B）的體積，用瓶裝水稀釋，得校準(zhǔn)溶液，見表4所示。每一個樣品瓶中加入1mL的PFBHA衍生，然后在每個樣品瓶中加入1g的NaCl，降低甲醛和水的混溶性，并增加頂空的平衡。

校準(zhǔn)：以濃度范圍為10.0-50ppb的甲醛作為校準(zhǔn)溶液，每個校準(zhǔn)點運行3次，以計算系統(tǒng)精密度。甲醛校準(zhǔn)曲線見圖2，甲醛線性相關(guān)系數(shù)的平方為0.998。在線性范圍內(nèi)，方法精密度很好，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表5所示。標(biāo)準(zhǔn)溶液的分析色譜圖見圖3所示，保留時間8.41min的化合物是甲醛肟，未反應(yīng)的PFBOA出峰時間為10.82min。

試驗采用5ppb的標(biāo)準(zhǔn)溶液測定方法精密度，該方法的檢測限約為5ppb，RSD19.30%。

樣品制備從當(dāng)?shù)氐闹扑幑?Getz Pharma®, India)獲得Plasdone,pregelatinised starch, povidone, polyethlene glycol (PEG400), microcrystalline cellulose 和lactose樣品。頂空樣品制備非常簡單，分別稱取上述樣品各（0.05g-2g）于不同的頂空瓶中，再分別加入10mL的I.S.溶液，1gNaCl和1mLPFBOA溶液。樣品瓶在頂空條件下加熱并分析。所有的樣品現(xiàn)用現(xiàn)配，并立刻進行分析。方法確認(rèn)通過10,20,30ppb三個濃度水平的加標(biāo)來測定該方法的回收率?；厥章手狄姳?所示，結(jié)果表明頂空技術(shù)可定量的分析溶液基質(zhì)中的甲醛。

在選擇輔料中低分子量甲醛的分析技術(shù)之前，已經(jīng)考慮到了方法靈敏度（檢測限）的目標(biāo)水平，該靈敏度與輔料的反應(yīng)有關(guān)。由于醛類化合物種類及與之反應(yīng)藥品之間的確切關(guān)系未知，并且兩者在藥物配方中的具體關(guān)系未知，所以假定希望檢測限是非常好糟糕的事情。在藥品配方中輔料和API的重量比超過100:1是不尋常的，對分子質(zhì)量為500的小分子API，輔料中醛類物質(zhì)的含量為1µg/g就可導(dǎo)致甲醛產(chǎn)物的含量超過ICH指南0.2%。因此輔料中低分子量的醛類物質(zhì)總量為1µg/g作為閾值是合理的。PFBHA衍生的一個主要優(yōu)勢是可以在溶液中完成，符合頂空分析的要求，且使用水作為基質(zhì)通常具有非常干凈的背景。

該應(yīng)用文獻(xiàn)建立了使用SHS-GC/MS簡單有效分析藥物輔料中甲醛的方法，方法快速、可靠，可用于分析大多數(shù)常規(guī)藥用輔料中低分子量的醛類物質(zhì)的定量分析。在1-50ppb濃度范圍內(nèi)甲醛具有很好的線性。該方法使用從當(dāng)?shù)厮帍S獲得的一些實際樣品進行確證，加標(biāo)回收率在80-120%之間。通過GC和MS聯(lián)用，甲醛肟不僅通過保留時間匹配進行鑒定，且通過質(zhì)譜棒圖的譜庫搜素確證