細(xì)胞缺氧/復(fù)氧（Hypoxia/Reoxygenation, H/R）模型是研究心肌缺血再灌注損傷、腦卒中及腫瘤微環(huán)境的核心工具。然而，傳統(tǒng)三氣培養(yǎng)箱不僅購置成本高、氣體消耗大，溫度和氧濃度的細(xì)微波動(dòng)還可能干擾細(xì)胞狀態(tài)，影響實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性。想要更經(jīng)濟(jì)、更便捷的缺氧方案？日本三菱瓦斯化學(xué)推出的D07細(xì)胞厭氧產(chǎn)氣袋（二氧化碳5%），只需搭配密封培養(yǎng)罐，就能在普通培養(yǎng)箱中快速創(chuàng)造＜0.1% O? 的穩(wěn)定缺氧環(huán)境，讓您的缺氧再灌注實(shí)驗(yàn)化繁為簡。作為三菱實(shí)驗(yàn)耗材中國區(qū)總代理，上海創(chuàng)凌生物為您詳細(xì)拆解操作步驟。

三菱D07細(xì)胞厭氧產(chǎn)氣袋（二氧化碳5%）核心原理

利用鐵粉氧化反應(yīng)吸收罐內(nèi)氧氣，同時(shí)釋放約5% CO?，無需加水、催化劑，不產(chǎn)熱，對細(xì)胞零損傷。放入密封罐后約30分鐘即可完成脫氧，配套的氧氣指示劑慢慢從紫色變?yōu)榉凵?/span>（指示劑變色時(shí)間較長，約6小時(shí)），厭氧狀態(tài)一目了然。

細(xì)胞缺氧再灌注實(shí)驗(yàn)操作方法

1、細(xì)胞準(zhǔn)備

將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿/板，正常培養(yǎng)至貼壁并達(dá)到所需密度。缺氧處理前吸棄原培養(yǎng)基，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求換成無糖DMEM、預(yù)先氮?dú)馄胶獾娜毖跖囵B(yǎng)基或其他低氧培養(yǎng)基。

2、裝載密封罐

將細(xì)胞培養(yǎng)皿迅速移入密封培養(yǎng)罐（建議使用2.5 L規(guī)格），打開一包D07厭氧產(chǎn)氣袋放入罐內(nèi)（內(nèi)含兩種產(chǎn)氣包，大的吸氧，小的吸二氧化碳，都放入密封培養(yǎng)罐，可放在培養(yǎng)皿上方或卡槽中），同時(shí)放入一片氧氣指示劑。

3、密封與缺氧誘導(dǎo)

蓋緊罐蓋，確保密封圈完好。將密封罐放入37℃常規(guī)培養(yǎng)箱。罐內(nèi)會(huì)迅速發(fā)熱，有少量水汽，30分鐘后罐內(nèi)O?濃度已＜0.1%，細(xì)胞進(jìn)入缺氧狀態(tài)。

4、缺氧培養(yǎng)

根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)持續(xù)缺氧培養(yǎng)（如2h、4h、6h等，產(chǎn)氣包設(shè)計(jì)氣體穩(wěn)定濃度最長可24小時(shí)）。期間指示劑保持粉色即說明厭氧條件穩(wěn)定，可透過透明罐壁隨時(shí)觀察。

5、復(fù)氧/再灌注處理

缺氧時(shí)間結(jié)束后，打開密封罐，快速取出細(xì)胞，吸棄缺氧培養(yǎng)基，換上預(yù)熱好的正常含氧含糖培養(yǎng)基，然后放回常規(guī)CO?培養(yǎng)箱（5% CO?，95%空氣）繼續(xù)培養(yǎng)。這一步驟即完成復(fù)氧，模擬體內(nèi)再灌注過程。

實(shí)驗(yàn)優(yōu)勢一覽

無需三氣培養(yǎng)箱，大幅降低設(shè)備投入與氣體成本；

操作簡單，重復(fù)性好，同一批次可同時(shí)處理多個(gè)樣本；

明確的氣體環(huán)境（O?＜0.1%，CO?約5%），契合主流缺氧模型需求；

反應(yīng)溫和，不影響細(xì)胞活力。

認(rèn)準(zhǔn)總代理——上海創(chuàng)凌生物

上海創(chuàng)凌生物科技有限公司是日本三菱瓦斯化學(xué)授權(quán)的中國區(qū)總代理，長期現(xiàn)貨供應(yīng)D07缺氧產(chǎn)氣袋、C-1厭氧產(chǎn)氣袋、微需氧產(chǎn)氣袋、密封培養(yǎng)罐及氧氣指示劑等全系列原裝產(chǎn)品。我們不僅提供正品保障與快速物流，更有專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)為您優(yōu)化缺氧實(shí)驗(yàn)方案，助您輕松獲得穩(wěn)定、高可重復(fù)性的細(xì)胞H/R模型。

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