實(shí)驗(yàn)室灰塵用的什么溶液提取,如何配制
實(shí)驗(yàn)室灰塵的提取溶液wan全取決于你要提取什么物質(zhì)。不同的目標(biāo)物(重金屬、有機(jī)污染物、微生物、DNA)所使用的提取液和配制方法截然不同。
以下我按照最常見的四大類分析目的,為您詳細(xì)列出提取溶液的配方及配制方法:
1. 提取重金屬/無機(jī)元素(環(huán)境毒性評(píng)價(jià))
灰塵中的重金屬通常以不溶于水的鹽或硅酸鹽形態(tài)存在,必須使用強(qiáng)酸將其che底消解(破壞基質(zhì))進(jìn)入液相。
常用提取液: 逆王水(硝酸:鹽酸 = 3:1,體積比),適用于大多數(shù)常量和微量元素。若灰塵含大量硅酸鹽(如建筑揚(yáng)塵),需加入氫氟suan(HF)。
如何配制(以配制 40 mL 逆王水為例):
準(zhǔn)備:在通風(fēng)櫥內(nèi)操作,佩戴耐酸堿手套、護(hù)目鏡。
量取:用玻璃量筒量取 30 mL 優(yōu)級(jí)純(GR)濃硝酸(HNO?),倒入聚四氟乙烯(PTFE)消解罐中。
量取:用玻璃量筒量取 10 mL 優(yōu)級(jí)純濃鹽酸,緩慢加入消解罐中。
混勻:輕輕搖晃消解罐,此時(shí)溶液會(huì)發(fā)熱并產(chǎn)生少量黃煙(氮氧化物),加蓋靜置冷卻后即可用于微波消解或電熱板消解。
警告:絕不可將水加入濃酸中,絕不可在非通風(fēng)櫥內(nèi)操作。若需加HF,必須使用塑料器皿(HF腐蝕玻璃),且廢液需用硼酸中和后才能排放。
2. 提取有機(jī)污染物(多環(huán)芳烴、阻燃劑、塑化劑等)
這類物質(zhì)親脂性強(qiáng),需使用有機(jī)溶劑將灰塵中的有機(jī)物萃取出來。
常用提取液: 正己烷:丙酮 = 1:1(體積比),或者 二氯甲烷:丙酮 = 1:1。這種混合溶劑極性適中,能提取絕大多數(shù)半揮發(fā)性和難揮發(fā)性有機(jī)物。
如何配制(以配制 500 mL 提取液為例):
準(zhǔn)備:在通風(fēng)櫥內(nèi)操作,有機(jī)溶劑易揮發(fā)、有毒。
量?。河貌AЯ客擦咳?250 mL 農(nóng)殘級(jí)(或色譜純)正己烷,倒入潔凈的帶塞玻璃試劑瓶中。
量?。毫咳?250 mL 農(nóng)殘級(jí)丙酮,加入同一試劑瓶中。
混勻:蓋緊瓶塞,上下顛倒搖勻。
注意:提取有機(jī)物所用的所有玻璃器皿必須提前用洗液浸泡,并在馬弗爐中 400℃ 烘烤 4 小時(shí),或者用提取液潤(rùn)洗三次,防止背景污染。
3. 提取微生物(細(xì)菌、真菌培養(yǎng))
如果要對(duì)灰塵中的活菌進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù),需要使用無菌的等滲緩沖液,防止細(xì)菌在水中吸水脹破,同時(shí)加入表面活性劑幫助細(xì)菌從灰塵顆粒上洗脫。
常用提取液: 含 0.05% 吐溫-80 (Tween-80) 的無菌磷酸鹽緩沖液 (1× PBS)
如何配制(以配制 1000 mL 為例):
配方: 稱取 8.0 g NaCl,0.2 g KCl,1.44 g Na?HPO?,0.24 g KH?PO?,0.5 g 吐溫-80。
溶解: 將上述試劑加入約 800 mL 去離子水中,磁力攪拌至wan全溶解(吐溫-80較粘稠,需多攪拌一會(huì))。
調(diào)pH: 用 1M HCl 或 1M NaOH 調(diào)節(jié) pH 值至 7.4。
定容: 加去離子水定容至 1000 mL。
滅菌: 將溶液分裝至玻璃瓶中,在 121℃ 高壓蒸汽滅菌 20 分鐘。冷卻后備用。
4. 提取微生物DNA(高通量測(cè)序、分子鑒定)
提取DNA不僅需要裂解細(xì)菌堅(jiān)硬的細(xì)胞壁,還要去除灰塵中大量的腐殖酸、金屬離子等PCR抑制物。不建議自己配制裂解液,因?yàn)榕浞綐O其復(fù)雜且對(duì)pH和純度要求極gao。
常用提取液: 商品化試劑盒的裂解液(如 QIAGEN DNeasy PowerSoil Pro Kit,或?qū)iT針對(duì)環(huán)境樣本的 DNA 提取試劑盒)。
提取流程簡(jiǎn)述:
物理破碎: 將灰塵樣本加入含有裂解珠和裂解液(通常是高濃度硫氰酸胍,強(qiáng)變性劑)的管中,在珠磨儀上劇烈震蕩,打破細(xì)胞壁。
化學(xué)裂解與結(jié)合: 裂解液釋放DNA,隨后加入結(jié)合液,使DNA結(jié)合到硅膠膜上。
洗滌: 使用含有乙醇的洗脫液(Wash Buffer)洗去蛋白質(zhì)、腐殖酸和鹽類。
洗脫: 用低鹽緩沖液(Elution Buffer,通常是 10mM Tris-HCl, pH 8.5)將純化的DNA從膜上洗脫下來。
?? 總結(jié)與建議
在配制任何提取液之前,請(qǐng)先明確您的檢測(cè)儀器(比如是 ICP-MS, GC-MS, 還是 PCR儀)以及檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)(如 EPA 標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)標(biāo) GB 等)。標(biāo)準(zhǔn)方法中會(huì)嚴(yán)格規(guī)定提取液的種類、濃度甚至試劑的純度等級(jí)(如重金屬用優(yōu)級(jí)純,有機(jī)物用農(nóng)殘級(jí)),請(qǐng)務(wù)必嚴(yán)格遵照標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
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