NanoDrop One C 出現(xiàn)純度比值異常時(shí)，先別急著做其他操作。通常，問題都源于樣品本身污染、溶劑不匹配，或是儀器基座有殘留物。你可以參考下表快速對(duì)照排查：

一、異常比值

1、A260/A280 < 1.8 (DNA)、A260/A280 < 2.0 (RNA)

原因：比值偏低

污染物：蛋白質(zhì)污染、苯酚、EDTA 等殘留、樣本 pH 值偏酸性、儀器光學(xué)路徑污染或基線未校準(zhǔn)好。

2、A260/A280 > 2.0 (DNA)、A260/A280 > 2.2 (RNA)

原因：比值偏高

污染物：RNA 污染、樣本 pH 值偏堿性、核酸發(fā)生降解。

3、A260/A230 < 1.8

原因：比值偏低

污染物：胍鹽 (Guanidine) 殘留、碳水化合物等有機(jī)物污染、苯酚、乙醇等殘留、樣本濃度過低，比值的參考意義下降。

4、A260/A230 > 2.2-2.4

原因：比值偏高

污染物：空白溶劑選擇不當(dāng)，與樣品溶解液不匹配、空白校準(zhǔn)時(shí)基座已受到污染。

二、確認(rèn)異常并復(fù)測(cè)

出現(xiàn)異常后，可以先進(jìn)行一次快速檢查，確認(rèn)問題是否依舊。

1、檢查光譜曲線：NanoDrop軟件會(huì)展示完整的光譜曲線。純凈的核酸曲線在260nm處有平滑的峰，而蛋白污染會(huì)在280nm附近出現(xiàn)小肩峰，苯酚污染則會(huì)在270nm處產(chǎn)生吸收峰。

2、執(zhí)行空白復(fù)測(cè)：用與樣品一致的空白溶劑進(jìn)行基線校準(zhǔn)后，用該空白溶劑重復(fù)讀數(shù)。若比值仍異常，則可能是基座有污染或儀器本身問題。

三、從儀器與操作出發(fā)排查

儀器本身的臟污和操作細(xì)節(jié)，是導(dǎo)致純度比值異常的常見原因。

1、清潔檢測(cè)基座：這是關(guān)鍵和首要的一步。用柔軟的無絨布蘸取去離子水或70%乙醇輕柔擦拭上下兩個(gè)基座表面，并待其干燥。

2、檢查空白溶液：空白溶液必須和樣品的溶劑一致。比如樣品用TE Buffer溶解，空白就應(yīng)使用相同的TE Buffer。TE Buffer在230nm附近有輕微吸收，用純水做空白而樣品用TE，會(huì)導(dǎo)致A260/A230比值異常偏低。

3、樣品本身均一性：大分子樣品（如基因組DNA）容易局部聚集，取樣不均會(huì)導(dǎo)致結(jié)果波動(dòng)。測(cè)量前務(wù)必充分渦旋震蕩并短暫離心。

四、從樣品污染物角度排查

如果儀器操作都沒問題，那么就要考慮可能是樣品本身不純，被一些常見物質(zhì)污染了。

1、A260/A280 比值偏低：

（1）蛋白污染：常見的原因。蛋白質(zhì)在280nm處有吸收峰，會(huì)拉高A280，導(dǎo)致比值偏低?？蓢L試用酚-氯仿抽提或蛋白酶K處理后再測(cè)。

（2）苯酚殘留：比值的理想范圍是1.8-2.0，苯酚殘留會(huì)略微降低A260/A280值?？梢栽龠M(jìn)行一次氯仿抽提去除。

（3）pH值影響：核酸在純水中溶解時(shí)，水的弱酸性會(huì)降低A260/A280比值約0.2-0.3。建議將核酸溶解在TE緩沖液（pH 8.0）中，能有效穩(wěn)定pH，提供更真實(shí)的比值。

2、A260/A280 比值偏高：

（1）RNA污染：較常見。RNA的A260/A280比值約為2.0，若DNA樣品中被RNA污染，比值會(huì)向2.0偏移?？捎肦Nase處理樣品。

（2）核酸降解：降解后的核酸會(huì)產(chǎn)生更多在260nm有吸收的游離核苷酸和短鏈分子，導(dǎo)致A260虛高，A260/A280比值隨之上升。

3、A260/A230 比值偏低：

（1）胍鹽殘留（常見于使用柱式提取試劑盒）：胍鹽在230nm附近有強(qiáng)吸收，會(huì)嚴(yán)重壓低A260/A230比值?？赏ㄟ^70%乙醇多次洗滌或在75%乙醇中延長(zhǎng)沉淀時(shí)間來去除。

（2）碳水化合物殘留（常見于植物樣本）：多糖類物質(zhì)也會(huì)在230nm處有吸收。可嘗試用高鹽溶液（如2M NaCl）沉淀核酸以去除多糖。

（3）樣品濃度過低：當(dāng)dsDNA濃度低于2 ng/μL時(shí)，A260/A230比值可能變得不穩(wěn)定，其參考意義會(huì)大大降低。

五、利用儀器內(nèi)置智能功能

如果你的 NanoDrop One C 搭載了 Acclaro 智能檢測(cè)技術(shù)，它可以幫你更輕松地找到問題所在：

1、Acclaro 污染物鑒定：當(dāng)純度比值異常時(shí)，軟件會(huì)通過黃色三角標(biāo)識(shí)預(yù)警，并直接在光譜圖上指出異常區(qū)域。它甚至能分析出是哪種污染物（如蛋白質(zhì)、苯酚、胍鹽等），并提供相應(yīng)的校正后濃度，有效排除干擾。

2、自動(dòng)基線校準(zhǔn)：NanoDrop One C 每次開機(jī)都會(huì)自動(dòng)進(jìn)行基線校準(zhǔn)。若懷疑基線有問題，也可以在軟件中手動(dòng)執(zhí)行“基線校準(zhǔn)”。

六、尋求專業(yè)幫助

如果以上所有方法都無效，請(qǐng)聯(lián)系專業(yè)維修。通常 80% 的軟件相關(guān)故障可以通過重啟解決，但如果清潔和復(fù)測(cè)后問題依舊，則可能指向內(nèi)部硬件（如光學(xué)路徑污染、光源老化或光電探測(cè)器故障）。