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GFP和EGFP分不清楚？今天小編將為大家詳細(xì)講解GFP和EGFP的相同和不同之處，以及如何快速觀察熒光表達(dá)！

GFP綠色熒光蛋白

GFP綠色熒光蛋白，英文全稱Green Fluorescent Protein，是一種在藍(lán)光或紫外光激發(fā)后發(fā)出綠色熒光的蛋白質(zhì)。

GFP天然存在于維多利亞多管發(fā)光水母中，所以也稱為野生型GFP。

GFP由238個氨基酸組成。GFP的大小為26.9kDa。GFP因其固有熒光而無需任何輔助分子，是分子生物學(xué)中的強(qiáng)工具。熒光是由于蛋白質(zhì)的連續(xù)氨基酸的共價重排而產(chǎn)生的。蛋白質(zhì)折疊后，主鏈原子Ser65、Tyr66和Gly67在O2存在下形成高度共軛的平面對羥基苯亞甲基咪唑啉酮發(fā)色團(tuán)。晶體結(jié)構(gòu)研究表明，發(fā)色團(tuán)堆積在分子β桶結(jié)構(gòu)的核心內(nèi)，可防止其因順磁性氧、水偶極子或順反異構(gòu)化而猝滅。此外，發(fā)色團(tuán)與鄰近分子的非共價相互作用增強(qiáng)了其光譜特性。

EGFP增強(qiáng)型綠色熒光蛋白

EGFP增強(qiáng)型綠色熒光蛋白，英文全稱Enhanced Green Fluorescent Protein，是野生型GFP的變體。

EGFP具有比GFP更高的發(fā)射強(qiáng)度。F64L和S65T這兩個突變生成的EGFP在37°C下具有更高的折疊效率。EGFP在490nm處具有單個激發(fā)峰，這是由于S65T抑制了395nm峰，因?yàn)樗{(diào)節(jié)附近Glu222的電離態(tài)。另一方面，F(xiàn)64L提高了37℃下的折疊效率。重要的是，EGFP的密碼子序列針對在哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行了優(yōu)化。

GFP和EGFP的區(qū)別

GFP和EGFP的相同之處：

1. GFP和EGFP都屬于綠色熒光蛋白，激發(fā)后都會發(fā)出綠色熒光。

2. GFP和EGFP不需要任何輔助酶/底物、輔因子或基因產(chǎn)物來顯示其顏色。因此，兩者都被用作分子生物學(xué)中基因表達(dá)的報告基因。

3. GFP和EGFP與發(fā)色團(tuán)形成經(jīng)典的β-桶狀折疊，包含穿過結(jié)構(gòu)核心的螺旋。

GFP和EGFP的區(qū)別：

1. GFP激發(fā)光峰值395nm，EGFP激發(fā)光峰值488nm。

2. GFP和EGFP被激發(fā)后都會發(fā)出綠色熒光，但是EGFP的綠色熒光更亮。

3. GFP是從維多利亞水母中分離出來的野生型蛋白質(zhì)，EGFP是野生型GFP的變體。

如何快速觀察GFP和EGFP？

如果同學(xué)們想看GFP或EGFP的綠色熒光表達(dá)，需要用相應(yīng)波長的激發(fā)光照射含GFP或EGFP的樣本：

• 觀察GFP用紫外光照射

• 觀察EGFP用藍(lán)光照射

下圖是LUYOR-3280RB藍(lán)光手電筒照射含GFP的煙草葉片后，觀察到的綠色熒光。

使用3280熒光手電筒僅需2步就可快速觀察熒光表達(dá)：

第一步：戴上熒光觀察眼鏡

第二步：打開手電筒，照射樣本，就可以直接看到熒光啦！

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