兔內(nèi)皮祖細胞是從兔體內(nèi)分離的血管內(nèi)皮前體細胞，具有增殖、遷移及分化為成熟內(nèi)皮細胞的能力，是心血管、缺血損傷修復、血管再生研究的核心細胞模型。

一、基本特性

來源：主要為骨髓、外周血、脾臟。

形態(tài)：

早期：圓形/類圓形

培養(yǎng) 48–72 小時：貼壁、短梭形/紡錘形

7 天左右：呈鋪路石樣內(nèi)皮形態(tài)

標志物：

祖細胞：CD133、CD34

內(nèi)皮系：CD31、vWF（VIII 因子）、VEGFR2（KDR）

功能：

體外可形成管腔樣結(jié)構(gòu)

能吞噬 Dil-acLDL、結(jié)合 FITC-UEA-1

分泌VEGF、bFGF等促血管因子

二、分離與培養(yǎng)（骨髓來源，常用）

1、取材

麻醉兔，取股骨/脛骨骨髓，用肝素化 PBS 沖洗

密度梯度離心

骨髓液疊加于Ficoll-Paque（1.077 g/mL）

2000 rpm 離心 20 min，收白膜層單個核細胞

2、接種與培養(yǎng)

培養(yǎng)基：ECM/EGM-2 + 10% FBS + VEGF + bFGF + 雙抗

接種于纖連蛋白（FN）包被的培養(yǎng)瓶

37℃、5% CO?培養(yǎng)；3 天半換液，7 天傳代

3、傳代

0.25% 胰酶 - EDTA 消化，1:2 傳代

建議用P2–P4 代做實驗

三、鑒定方法

形態(tài)：7 天呈梭形、鋪路石樣

免疫熒光/流式：

陽性：CD34、CD133、CD31、vWF、VEGFR2

雙熒光吞噬：

Dil-acLDL（紅）+ FITC-UEA-1（綠）雙染陽性 >80%

體外成管：基質(zhì)膠上6–12 小時形成管狀結(jié)構(gòu)

四、主要應(yīng)用

1、心血管疾病

心肌梗死模型：移植 EPCs 提升LVEF、增加毛細血管密度

2、缺血性疾病

下肢缺血、腦缺血：促進血管新生、改善血供

3、血管損傷修復

球囊損傷后再狹窄：抑制內(nèi)膜增生、保護內(nèi)皮

4、急性肺損傷

歸巢至肺損傷部位，修復內(nèi)皮、減輕肺水腫、抗炎

糖尿病血管病變、傷口愈合

五、注意事項

純度：原代含雜細胞，P2–P3較純

代次：P4 后分化能力下降、易衰老

污染：骨髓/血液易帶菌，嚴格無菌、加雙抗

培養(yǎng)基：必須含VEGF、bFGF維持干性

六、與人類 EPCs 對比

優(yōu)勢：兔血管結(jié)構(gòu)、生理與人接近，造模穩(wěn)定、倫理限制少

局限：標志物與人略有差異，試劑抗體選擇有限

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