大豆作為全球重要的油料與經(jīng)濟(jì)作物，其轉(zhuǎn)基因育種與基因功能研究一直是農(nóng)業(yè)科技領(lǐng)域的焦點(diǎn)。在大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系中，綠色熒光蛋白（GFP/eGFP）因其直觀、靈敏且無(wú)放射性的特點(diǎn)，常被用作報(bào)告基因以指示外源基因的轉(zhuǎn)化狀態(tài)。然而，大豆子葉肥大、葉綠素含量高，傳統(tǒng)的GFP檢測(cè)往往需要借助熒光顯微鏡對(duì)切片或提取液進(jìn)行檢測(cè)，操作繁瑣且具有破壞性。

針對(duì)這一痛點(diǎn)，上海路陽(yáng)推出了LUYOR-3415RG便攜式雙波長(zhǎng)熒光蛋白激發(fā)光源。該設(shè)備能夠輸出高強(qiáng)度的440–470 nm藍(lán)光，高效激發(fā)大豆組織中的GFP發(fā)出明亮的綠色熒光。配合專(zhuān)用黃色濾光眼鏡（LUV-50A），研究人員可在溫室或大田環(huán)境下，對(duì)大豆再生苗及愈傷組織進(jìn)行無(wú)損、實(shí)時(shí)、高通量的陽(yáng)性株篩選，極大地簡(jiǎn)化了大豆轉(zhuǎn)基因育種的初篩流程。

一、實(shí)驗(yàn)材料

• 待測(cè)材料：含GFP報(bào)告基因的轉(zhuǎn)基因大豆T?代再生苗（子葉期至V2期）或T?代萌發(fā)種子。

  
  

• 陰性對(duì)照：未轉(zhuǎn)化的受體大豆品種（如Williams 82、中黃13等）。

  
  

• 儀器與耗材：

  
  

• LUYOR-3415RG 雙波長(zhǎng)熒光蛋白激發(fā)光源

  
  

• 配套黃色熒光觀察眼鏡 LUV-50A

  
  

• 暗室或遮光環(huán)境（溫室角落、紙箱均可）

  
  

二、篩選操作流程

1. 樣品準(zhǔn)備

將大豆轉(zhuǎn)基因再生苗或萌發(fā)的T?代種子置于光照培養(yǎng)箱或溫室中。大豆GFP表達(dá)通常在下胚軸（Hypocotyl）和根部最為明顯，因此重點(diǎn)觀察這兩個(gè)部位。

2. 熒光激發(fā)與觀察

1. 環(huán)境布置：關(guān)閉室內(nèi)主光源，營(yíng)造弱光環(huán)境。

   
   

2. 佩戴裝備：操作人員佩戴LUV-50A黃色濾光眼鏡。

   
   

3. 照射觀察：

   
   

• ? 陽(yáng)性株：下胚軸皮層或根尖呈現(xiàn)亮綠色熒光，與周?chē)瞪尘靶纬蓮?qiáng)烈反差。（可以找后臺(tái)工作人員判斷）

  
  

• ? 陰性株：僅顯示暗色或深褐色的葉綠素背景，無(wú)綠色光斑。

  
  

• 開(kāi)啟LUYOR-3415RG的藍(lán)光通道。

  
  

• 將光斑對(duì)準(zhǔn)大豆幼苗的下胚軸或根尖部位，距離保持在15–25 cm。

  
  

• 通過(guò)濾光眼鏡觀察：

  
  

3. 結(jié)果記錄

利用智能手機(jī)加裝黃色濾光片，拍攝記錄陽(yáng)性植株。建議對(duì)陽(yáng)性苗進(jìn)行掛牌標(biāo)記，隨后轉(zhuǎn)入正常的抗性篩選（如草甘膦/草銨膦）或分子鑒定流程。

三、大豆篩選的特殊注意事項(xiàng)

1. 避開(kāi)子葉干擾：大豆子葉富含葉綠素，自發(fā)熒光強(qiáng)，容易掩蓋GFP信號(hào)。建議重點(diǎn)觀察下胚軸和根部，此處GFP信噪比最高。

   
   

2. 愈傷組織篩選：對(duì)于正在進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的大豆愈傷組織，可在體視鏡下直接用3415RG照射，快速剔除未轉(zhuǎn)化或空載體愈傷，減少后期工作量。

   
   

3. 光照控制：由于大豆葉片較大，建議在傍晚或全黑環(huán)境下觀察，以獲得最佳對(duì)比度。

   
   

四、小結(jié)

LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源為大豆轉(zhuǎn)基因研究提供了一種高效的可視化工具。它不僅解決了大豆因組織致密導(dǎo)致的GFP觀察難問(wèn)題，更實(shí)現(xiàn)了從“實(shí)驗(yàn)室顯微觀察”到“田間手持篩選”的跨越，是大豆生物技術(shù)與分子育種實(shí)驗(yàn)室的理想標(biāo)配儀器。

LUYOR-3415RG大豆轉(zhuǎn)基因GFP篩選大豆遺傳轉(zhuǎn)化熒光蛋白激發(fā)光源植物活體成像下胚軸熒光