玉米是我國主要糧食作物，也是“飼料大佬”。然而長期以來，我國雜交種玉米蛋白含量普遍偏低（僅8%左右），蛋白質(zhì)飼料原料嚴(yán)重依賴進(jìn)口，玉米也是基因工程與分子育種的重要模式植物。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)或基因槍法轉(zhuǎn)化玉米的過程中，常將綠色熒光蛋白（GFP/eGFP）作為可視化的報(bào)告基因引入表達(dá)載體，用以快速判斷外源基因是否成功整合與表達(dá)。傳統(tǒng)方法需剪取葉片提取DNA后進(jìn)行PCR擴(kuò)增或借助熒光顯微鏡逐一樣本觀察，不僅工作量大、耗時(shí)長，且對珍貴轉(zhuǎn)化材料具有一定破壞性。

上海路陽自主研發(fā)的LUYOR-3415RG便攜式雙波長熒光蛋白激發(fā)光源，采用大功率LED陣列輸出440–470 nm藍(lán)光（配合510–560 nm綠光通道激發(fā)RFP），可高效激發(fā)GFP/eGFP發(fā)出530 nm左右的綠色熒光。配合專用黃色濾光觀察眼鏡（LUV-50A/LUV-40A），研究人員無需破壞植株、無需暗室改建，即可在溫室、培養(yǎng)室甚至田間對轉(zhuǎn)基因玉米T?/T?代幼苗進(jìn)行無損、高通量的活體初篩，將傳統(tǒng)"破壞性分子檢測"升級(jí)為"一秒肉眼判別"。

一、實(shí)驗(yàn)材料

待測材料：含GFP報(bào)告基因及bar篩選標(biāo)記（可選）的轉(zhuǎn)基因玉米T?再生苗或T?代種子萌發(fā)2～4葉期幼苗

陰性對照：未轉(zhuǎn)化的同源受體玉米品種

儀器與耗材：

LUYOR-3415RG雙波長熒光蛋白激發(fā)光源（美國路陽·中國）

套黃色熒光觀察眼鏡 LUV-50A 或 LUV-40A

遮光暗室或關(guān)燈后的溫室（提高對比度

數(shù)碼相機(jī)+黃色濾光片（用于拍照記錄，可選

二、篩選操作流程

樣品培養(yǎng)：將轉(zhuǎn)基因玉米T?代種子或T?再生苗播種于育苗缽，溫室條件下培養(yǎng)至2～4葉期（真葉展開，下胚軸及幼葉可見）。同步培養(yǎng)未轉(zhuǎn)化對照苗以排除葉綠素本底干擾。

暗環(huán)境觀察：關(guān)閉室內(nèi)照明或拉簾制造弱光環(huán)境，操作者佩戴黃色濾光眼鏡。開啟LUYOR-3415RG的藍(lán)光通道（≈450 nm），距植株葉片或下胚軸10～30 cm均勻照射。

? GFP陽性株：莖尖、下胚軸或真葉部位呈現(xiàn)明亮翠綠色熒光，背景為暗紅/暗紫色；（可以聯(lián)系后臺(tái)工作人員判斷）

? 陰性/未轉(zhuǎn)化株：僅見暗色葉綠素自發(fā)熒光背景，無綠色熒光亮點(diǎn)。

記錄與分選：對陽性株編號(hào)標(biāo)記并用手機(jī)（加黃色濾光片）拍照存檔，將陽性苗單獨(dú)移栽繼續(xù)培養(yǎng)或用于后續(xù)PCR/Southern驗(yàn)證。

LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源已被中國農(nóng)科院、中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、各省農(nóng)科院等多家科研機(jī)構(gòu)用于水稻、玉米、小麥、大豆等作物的轉(zhuǎn)基因種子及幼苗熒光標(biāo)記分選。將其引入玉米GFP轉(zhuǎn)化株篩選流程，可成倍提升初篩通量、保護(hù)活體材料、顯著縮短育種周期，是現(xiàn)代轉(zhuǎn)基因植物研究與分子育種中值得信賴的現(xiàn)場可視化檢測工具。

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