LUYOR-3415RG 在農(nóng)桿菌侵染煙草葉片 GFP 瞬時(shí)表達(dá)篩選中的應(yīng)用

應(yīng)用背景

在植物瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)中，常利用農(nóng)桿菌（Agrobacterium tumefaciens）侵染本氏煙（N. benthamiana）葉片，攜帶 35S::GFP 或融合 GFP 標(biāo)簽的外源基因。傳統(tǒng)陽(yáng)性鑒定依賴(lài) RT-PCR 或熒光顯微鏡觀察，耗時(shí)且通量低。利用 LUYOR-3415RG 手持式熒光激發(fā)燈（365 nm / 450 nm 雙波段） 可在暗室中對(duì)侵染后葉片直接進(jìn)行 無(wú)損 GFP 熒光初篩，快速鎖定陽(yáng)性克隆。

實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)程

1. 農(nóng)桿菌（含 pCAMBIA1300-GFP 等載體）培養(yǎng)至 OD???≈0.6–1.0，注射滲透（syringe infiltration）本氏煙下表皮。

   
   

2. 22–28℃ 暗培養(yǎng) 24–72 h。

   
   

3. 暗室中取 LUYOR-3415RG，切換至 365 nm（UV） 檔，距葉片 3–8 cm 照射：

   
   

• GFP 陽(yáng)性：葉肉/葉脈處見(jiàn)明顯黃綠熒光（肉眼可見(jiàn)）；

  
  

• 陰性/野生型：僅有極弱葉綠素自發(fā)熒光或無(wú)特征綠光。

  
  

4. 陽(yáng)性葉片標(biāo)記，用于后續(xù)蛋白提取 / 共聚焦驗(yàn)證 / PCR 確證。

   
   

結(jié)果特點(diǎn)

• 可在侵染后 24–48 h 即見(jiàn)信號(hào)，早于表型出現(xiàn)；

  
  

• 同一葉片可多次觀察，不破壞組織，后續(xù)仍可采樣；

  
  

• 對(duì)大量轉(zhuǎn)化材料做 初篩（pre-screening），可減少 60–80% 不必要的 PCR/WB 工作量。

  
  

儀器參數(shù)

• 型號(hào)：LUYOR-3415RG

  
  

• 激發(fā)：365 nm（UV）/ 450 nm（Blue），適用于 GFP / RFP 雙檢

  
  

• 光源：LED 冷光源，短時(shí)照射不影響葉片活力

  
  

適用于：本氏煙瞬時(shí)表達(dá)、轉(zhuǎn)基因煙草 T?/T? 初篩、病毒誘導(dǎo)基因沉默（VIGS）效率評(píng)估（GFP 報(bào)告）。