小鼠皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞是研究皮膚鱗狀細(xì)胞癌（cSCC）發(fā)病機(jī)制、藥物篩選和治療策略的重要工具。

一、培養(yǎng)基 & 血清

優(yōu)先用 高糖 DMEM + 10% FBS + 1% 雙抗

不要隨便換 1640、低糖 DMEM，容易長慢、變圓

血清必須試批次，不然形態(tài)、增殖、成瘤都會崩

換液：2～3 天一次，不要等到變黃才換

二、消化傳代（最容易翻車）

胰酶 0.25%：消化 1～3 min，看到細(xì)胞變圓、間隙變大立刻停

這類細(xì)胞極怕過消化，一過消化就大量飄、不貼壁

輕柔吹打成單細(xì)胞，不要暴力吹打

匯合度 70%～80% 就傳，別長滿

傳代比例：1:3～1:4 最合適

三、細(xì)胞形態(tài)（判斷狀態(tài)標(biāo)準(zhǔn)）

正常：鋪路石樣、多角形、緊密排列

異常：

大量變圓、漂浮 → 消化過度/血清差/污染

變細(xì)長梭形 → 分化或成纖維污染

碎片多、不長 → 支原體或老化

四、換液 & 操作

加液沿壁慢加，不要直沖細(xì)胞

復(fù)蘇后 24h 必須貼壁，不貼基本廢了

不要反復(fù)凍融、高代數(shù)培養(yǎng)，P3～P10 做實(shí)驗(yàn)最穩(wěn)

五、支原體 & 污染

莫名長慢、變圓、碎片多 → 優(yōu)先查支原體

一旦污染直接扔，不要救

六、凍存 & 復(fù)蘇

凍存：90% 胎牛血清 + 10% DMSO

梯度降溫后液氮保存，不要長期放 -80℃

復(fù)蘇：37℃快融 → 離心去 DMSO → 第二天換液

七、用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（成瘤關(guān)鍵）

只用狀態(tài)好、低代數(shù)、形態(tài)典型的細(xì)胞

不要用老化、過密、形態(tài)差的，成瘤率直接暴跌

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