摘要：本研究建立了一種高效、靈敏的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）方法，用于篩查動物源性食品中53種興奮劑。樣品經(jīng)2%甲酸-乙腈/水（80/20，v/v）溶液提取，利用FaVEx-AP固相萃取柱進行一步凈化，以C18色譜柱（100 mm × 2.1 mm × 1.8 μm）進行分離，采用多反應(yīng)監(jiān)測模式進行質(zhì)譜分析。方法驗證結(jié)果表明，53種目標化合物在0.25–10 μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R²）均大于0.99，檢出限為0.25–10 μg/kg，定量限為1–10 μg/kg。樣品加標回收率在62.25%–123.32%之間，相對標準偏差（RSD）為1.17%–22.03%。本方法前處理簡便、快速，凈化效果好，靈敏度高，適用于豬肉、魚肉、雞肉等動物源性食品中多種興奮劑的同時篩查與定量檢測。

本方法采用酸性乙腈溶液對動物源性食品中的53種興奮劑進行有效提取。通過創(chuàng)新的FaVEx-AP固相萃取柱進行一步凈化，能夠高效去除油脂、蛋白質(zhì)等基質(zhì)干擾，凈化流程快速簡便。采用LC-MS/MS在dMRM模式下進行檢測，通過優(yōu)化色譜梯度與質(zhì)譜參數(shù)，實現(xiàn)了53種不同極性化合物在8分鐘內(nèi)的高效分離與準確定性定量。

一、 實驗方法

1. 樣品前處理流程：

· 準確稱取一定量的樣品于50 mL離心管中。

· 加入10 mL0.2%甲酸-乙腈/水（80/20, v/v）提取液。

· 劇烈振蕩15分鐘。

· 于5000 r/min離心5分鐘。

· 取一定體積的上清液FaVEx-AP凈化柱進行凈化，流速控制為每秒1滴。

· 收集全部流出液，取2 mL于氮吹儀中吹干。

· 用1 mL10%甲醇水溶液（10/90, v/v）復(fù)溶。

· 溶液經(jīng)0.22 μm有機濾膜過濾后，供LC-MS/MS分析。

2、標準溶液的配制

1. 標準儲備液（1 mg/mL）：分別稱取適量各興奮劑標準品，用甲醇溶解并定容，配制成1 mg/mL的單一標準儲備液，于-18°C避光保存。

2. 混合標準工作溶液（1.0 μg/mL）：準確吸取適量各單一儲備液，用甲醇稀釋，配制成53種目標物濃度均為1.0 μg/mL的混合標準工作溶液，于-18°C避光保存。

3. 基質(zhì)匹配標準曲線溶液：使用經(jīng)前處理凈化后的空白樣品基質(zhì)溶液，逐級稀釋混合標準工作溶液，配制系列濃度的基質(zhì)匹配標準曲線溶液（濃度點通常包含：1, 2, 5, 10, 20, 50, 100 ng/mL等），現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、 儀器分析條件：色譜條件

· 色譜柱： C18 (2.1 × 100 mm, 1.8 μm)

· 柱溫： 40 °C

· 流動相：

o A相： 2 mM甲酸銨水溶液（含0.01%甲酸）

o B相： 乙腈

· 流速： 0.40 mL/min

· 進樣量： 5 μL

· 梯度洗脫程序：

質(zhì)譜條件

· 離子源：電噴霧電離源

· 掃描模式： 正離子模式（ESI?）

· 監(jiān)測模式： 動態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測（dMRM）

· 離子源參數(shù)：

o 氣簾氣：10 L/min

o 霧化氣：45 psi

o 輔助加熱氣：11 L/min

o 離子源溫度：325 °C

o 噴霧電壓：+3500 V

三、回收率與精密度數(shù)據(jù)

下表列出了53種興奮劑在豬肉基質(zhì)中添加水平分別為1倍定量限、2倍定量限和5倍定量限時的平均回收率及相對標準偏差（RSD, n=6）測試的藥劑清單如下：

α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、3-甲氧基可爾特羅、福莫特羅、阿替洛爾、班布特羅、倍氯米松、芐氟噻嗪、倍他米松、寶丹酮、溴布特羅、卡替洛爾、坎利酮、氯噻嗪、西布特羅、克侖特羅、克侖塞羅、克侖異己特羅、克侖潘特羅、克侖丙羅、氯丙那林、可爾特羅、可的松、地塞米松、氟氫可的松、腎上腺素、氫化可的松、羥甲基克侖特羅、異舒普林、馬布特羅、馬噴特羅、美雄酮、甲基潑尼松龍、美托洛爾、諾龍、奧達特羅、潑尼松龍、普萘洛爾、萊克多巴胺、沙丁胺醇、螺內(nèi)酯、特布他林、丙酸睪酮、托拉塞米、群勃龍、曲托喹酚、氨苯蝶啶、妥洛特羅、齊帕特羅

興奮劑與激素殘留的高通量篩查"style="color:red"/>興奮劑與激素殘留的高通量篩查"style="color:red"/>

注：表中“—”表示原文獻在該加標水平下未提供相應(yīng)數(shù)據(jù)。

四、結(jié)論

本研究成功開發(fā)并驗證了一種基于LC-MS/MS結(jié)合FaVEx-AP凈化柱技術(shù)的檢測方法，用于動物源性食品中53種興奮劑的高通量篩查。該方法具有以下顯著優(yōu)點：

1. 前處理高效簡便：采用一步式固相萃取凈化，大幅縮短了樣品前處理時間。

2. 分析速度快：8分鐘內(nèi)完成53種化合物的色譜分離。

3. 靈敏度高、準確性好：方法檢出限低，定量準確，各項方法學指標均滿足殘留檢測的技術(shù)要求。

4. 適用性廣：經(jīng)豬肉、魚肉和雞肉基質(zhì)驗證，表明該方法適用于多種動物源性食品基質(zhì)。

本方法為食品安全監(jiān)管實驗室提供了一種可靠、高效的興奮劑多殘留檢測解決方案，具有良好的應(yīng)用前景。