UVB交聯(lián)儀（UV Crosslinker）在HaCaT細(xì)胞光損傷模型構(gòu)建中的應(yīng)用——以梔子果提取物抗光保護研究為例

摘要： 在皮膚光老化及化妝品活性成分功效評價中，建立穩(wěn)定可靠的UVB誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）損傷模型是關(guān)鍵前提。本文結(jié)合中國藥科大學(xué)與上海君宇生物聯(lián)合發(fā)表在《Cosmetics》上的最新研究，介紹UVB交聯(lián)儀（UV Crosslinker）在UVB照射劑量控制、HaCaT細(xì)胞光損傷模型構(gòu)建中的應(yīng)用，并展示其在天然產(chǎn)物抗光保護機制研究中的支撐作用。

本文介紹了UVB交聯(lián)儀（UV Crosslinker）在構(gòu)建HaCaT細(xì)胞光損傷模型中的應(yīng)用。結(jié)合中國藥科大學(xué)最新研究，闡述了如何利用302nm紫外輻照技術(shù)，精準(zhǔn)控制10 mJ/cm2劑量，評估梔子果提取物對UVB誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)及皮膚屏障修復(fù)的作用，為化妝品原料的功效評價提供標(biāo)準(zhǔn)化實驗方案。

一、研究背景與實驗需求

紫外線B（UVB，290–320 nm）雖僅占地表太陽輻照的5%，卻是導(dǎo)致皮膚急性曬傷、氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)的主要波段。評價植物提取物或化妝品活性成分的抗光老化功效，通常需在細(xì)胞水平建立UVB誘導(dǎo)損傷模型——即以特定劑量UVB照射培養(yǎng)的人永生化表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT），觀察活性氧（ROS）、抗氧化酶、炎癥因子及屏障蛋白的變化。

此類實驗對UVB照射劑量的準(zhǔn)確性、波長穩(wěn)定性及輻照均勻性有嚴(yán)格要求，傳統(tǒng)紫外燈箱難以精確控制累積劑量，因此需采用具備劑量設(shè)定與關(guān)閉功能的UVB交聯(lián)儀（UV Crosslinker）。

二、實驗中的UVB照射方案

在中國藥科大學(xué)該項研究中（Zong et al., Cosmetics2025, 12, 72），實驗步驟如下：

• 儀器配置：采用配備302 nm UVB燈的UV交聯(lián)儀（UV Crosslinker，Luyor，中國上海）作為UVB照射源。

  
  

• 細(xì)胞處理：HaCaT細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿，吸除原培養(yǎng)基，覆以薄層PBS防止干燥；置于交聯(lián)儀內(nèi)，設(shè)定UVB照射劑量為10 mJ/cm2。

  
  

• 后續(xù)培養(yǎng)：照射結(jié)束后更換含不同濃度梔子果提取物（GFE，12.5/25/50 μg/mL）的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱孵育24 h，進行抗氧化、抗炎及屏障修復(fù)指標(biāo)檢測。

  
  

三維重建表皮模型則采用相同UVB光源，以400 mJ/cm2劑量照射后給予GFE處理，進行免疫熒光分析。

文獻(xiàn)原文引用（Materials and Methods—Cell Culture and UVB Irradiation）：

"UV irradiation was performed using a UV crosslinker (Luyor, Shanghai, China) and UVB lamps (λ = 302 nm) at a dose of 10 mJ/cm2. HaCaT cells were covered with a thin layer of PBS and exposed to UVB. After irradiation, the medium was replaced…"

三、UVB交聯(lián)儀主要技術(shù)特點（科研適用）

四、研究結(jié)果簡述

研究通過UVB交聯(lián)儀精準(zhǔn)控制10 mJ/cm2照射劑量，成功建立了HaCaT細(xì)胞光損傷模型。結(jié)果顯示：

• GFE顯著降低UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)ROS及MDA水平，提升T-SOD、CAT、GSH-Px活性；

  
  

• GFE抑制IL-6、IL-1β分泌，減輕炎癥反應(yīng)；

  
  

• 在三維表皮模型中，GFE上調(diào)絲聚蛋白（FLG）、兜甲蛋白（LOR）及內(nèi)披蛋白（IVL）表達(dá)，修復(fù)UVB導(dǎo)致的屏障損傷；

  
  

• 蛋白質(zhì)組學(xué)與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)提示環(huán)烯醚萜類成分可能通過調(diào)控細(xì)胞周期G2/M檢查點及p53通路發(fā)揮作用。

  
  

該研究的UVB定量照射環(huán)節(jié)高度依賴UV交聯(lián)儀的劑量可控性，保證了不同批次細(xì)胞模型的一致性與可重復(fù)性。

五、小結(jié)

UVB交聯(lián)儀（UV Crosslinker）憑借精確的劑量設(shè)定與穩(wěn)定的UVB（302 nm）輸出，已成為皮膚光生物學(xué)、化妝品功效評價及光醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究中構(gòu)建細(xì)胞光損傷模型的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。本案例表明，其在支持天然產(chǎn)物抗光保護機制探索、為化妝品新原料提供科學(xué)證據(jù)方面具有重要應(yīng)用價值。

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