一、用親水性相互作用色譜柱NH2P-50 4E分析咪唑二肽

鵝肌肽是組氨酸和β-丙氨酸的二肽，肌肽是1-甲基-L-組氨酸和β-丙氨酸的二肽，總稱為咪唑二肽。咪唑二肽在禽類的胸部肉、金槍魚(yú)、鰹魚(yú)、鯨魚(yú)肉中含量很多。下圖是使用聚合物基質(zhì)氨基柱Asahipak NH2P-50 4E利用親水模式分析鵝肌肽、肌肽、β-丙氨酸、1-甲基-L-組氨酸的應(yīng)用實(shí)例，能達(dá)到良好的分析效果。
【注意】本實(shí)驗(yàn)色譜柱需要事先平衡。
色譜柱平衡：50 mM NaH2PO4 aq.使用0.5 mL/min通液2小時(shí)，再置換成流動(dòng)相。

Sample : 20 μL
1. β-Alanine 200 μg/mL
2. 1-Methyl-L-histidine 2 μg/mL
3．L-Anserine 5 μg/mL
4. Histidine 5 μg/mL
5. L-Carnosine 5 μg/mL
6. Nitrate
(derived from L-Anserine Nitrate)

Column: Shodex Asahipak NH2P-50 4E (4.6 mm I.D. x 250 mm)

Eluent: 50 mM NaH2PO4 aq./CH3CN=40/60

Flow rate: 1.0 mL/ min

Detector: UV (210 nm)

Column temp.: 40 ℃

二、用親水性相互作用色譜柱VC-50 2D分析小分子肽

近年來(lái)小分子肽（二肽，三肽）的生理功能受到關(guān)注。 以下是使用聚合物基質(zhì)HILIC色譜柱HILICpak VC-50 2D柱進(jìn)行二肽和三肽的LC/MS分析，含有堿性氨基酸的肽保留強(qiáng)。

Sample : 5 μL  50 ng/mL each (in H2O)

Column: Shodex HILICpak VC-50 2D (2.0 mm I.D. x 150 mm)

Eluent: (A); 100 mM HCOOH aq. (B); CH3CN

      Linear gradient (High pressure);

     (B %) 60 % (0 to 5 min)，60 % to 10% (5 to 6 min)，10 % (6 to 15 min)，60 % (15.1 to 20 min)

Flow rate: 0.3 mL/min

Detector: ESI-MS (SIM Positive)

Column temp.: 40 ℃

三、用聚合物反相色譜柱ODP-50 6D在酸性和堿性流動(dòng)相下分析多肽

多肽是由多個(gè)氨基酸通過(guò)肽鍵連接而形成的一類化合物，通常由10~100個(gè)氨基酸分子組成，相對(duì)分子質(zhì)量低于10000。多肽在生物體內(nèi)廣泛參與和調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)各系統(tǒng)、器官、組織和細(xì)胞的功能活動(dòng)，在生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。近年來(lái)，利用現(xiàn)代生物技術(shù)合成的多肽藥物已成為藥物研發(fā)的熱點(diǎn)之一，目前已廣泛應(yīng)用多種疾病的預(yù)防、診斷和治療，具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。

以下是使用Asahipak ODP-50 6D (反相色譜柱) 在酸性和堿性流動(dòng)相下多肽的分析。

Sample:

1.Glu-Gly-Phe

2.Met-Enkephalin

3.Leu-Enkephalin

4.Leu-Trp-Met

Column：Shodex Asahipak ODP-50 6D (6.0 mm I.D. x 150 mm)

Eluent：(1); 0.05 % TFA aq./CH3CN=85/15
(2); 50 mM Ammonium acetate buffer(pH10.0)/CH3CN=85/15

Flow rate：1.0 mL/min

Detector：UV (220 nm)

Column temp.：30 ℃

四、用復(fù)合模式柱GS-320 HQ分析多肽

雖然Asahipak GS-HQ系列基本上是SEC模式色譜柱，但其結(jié)合了疏水性相互作用(RPC)和離子相互作用模式(IEX: ion exclusion)，這種復(fù)合模式使原先不能分離的分析實(shí)驗(yàn)變?yōu)榭赡堋Ｈ缦聦?shí)例可見(jiàn)，等電點(diǎn)(pI)低的酸性肽由于離子排阻作用先被洗脫，等電點(diǎn)高的堿性肽由于離子交換作用較晚被洗脫出來(lái)。由此可以在分離酸性肽和堿性肽上發(fā)揮作用。

Sample: 20 µL

1.Glu-Ala-Glu 0.025 %

2.Arg-Asp 0.05 %

3.Gly-His-Lys 0.025 %

4.Arg-Pro-Lys-Pro 0.025 %

PI: Isocratic point
Σf: Hydrophobic parameter

Column：Shodex Asahipak GS-320 HQ (7.5 mm I.D. x 300 mm)

Eluent：50 mM Ammonium acetate buffer (pH6.7)

Flow rate：0.5 mL/min

Detector：UV (220 nm)

Column temp.：30 ℃

五、用水溶性尺寸排阻柱KW-802.5根據(jù)EP標(biāo)準(zhǔn)分析特立帕肽

特立帕肽是一種合成的多肽激素（分子量約為4,100），為人甲狀旁腺素PTH的1-34氨基酸片段，用于治療骨質(zhì)疏松癥。歐洲藥典(EP 9.0*)對(duì)于其高分子雜質(zhì)的分析規(guī)定使用排阻限150,000的水溶性硅膠基質(zhì)蛋白質(zhì)分離色譜柱，系統(tǒng)適應(yīng)性要求單體和二聚體的分離度達(dá)到2.0以上。使用PROTEIN KW-802.5可以滿足相關(guān)藥典關(guān)于系統(tǒng)適用性的要求。（*數(shù)據(jù)采集時(shí)的版本）

Sample: 20 µL
(Resolution solution)

1.0 mg/mL of Teriparatide** in H2O
**pretreated at 75 ℃ for 24 hours

1.Trimer

2.Dimer

3.Monomer

Column：Shodex PROTEIN KW-802.5 (8.0 mm I.D. x 300 mm)

Eluent：H2O/CH3CN/TFA=750/250/1

Flow rate：0.5 mL/min

Detector：UV (214 nm)

Column temp.：25 ℃

產(chǎn)品信息

 （——END——）